离体条件下梨花柱S-RNase降解花粉管RNA特性的研究.pdfVIP

种植业科学与技术 9 离体条件下梨花柱S—RNase降解花粉管RNA．特性研究 徐义流1’2，张绍铃2 (1．安徽省农业科学院，合肥230031；2．南京农业大学园艺学院，南京210095) 摘要：梨(以兀坫)等蔷薇科果树具有典型的配子体型自交不亲和性。本研究以主栽的梨品种“丰水”、“幸水”为试材，采集大花 表明，用0．0576U、0．0384U花柱S—RNase反应15min后，完全降解了15 Ixg自花花粉管RNA，只轻微地降解了异花花粉管RNA；用 0．0192 U花柱S-RNase反应15min后，完全降解了15 u花柱S-RNase反 P-g自花花粉管RNA，但没能降解异花花粉管RNA；用0．0115 应30 rain后’，自花花粉管RNA被明显降解，反应60min时，15Izog自花花粉管RNA被全部降解；用0．0192U“丰水”和“幸水”花柱s— RNase分别处理15斗g“丰水”花柱RNA和酵母RNA，在反应15 对自花花粉管RNA的降解具有特异性，这种特异性不仅取决于花柱S-RNase，与花粉管RNA也有关系，是两者共同作用的结果。 关键词：梨；自交不亲牙口性；花拄S-RNase；降解；花粉管RNA 自从Darwin发现植物自交不亲和性(self-incompat— 本研究在分离纯化出花柱S-RNase和花粉、花粉管 ibility，st)现象以来，世界上有许多学者对植物SI的机 理进行了深入而细致地研究，取得了许多突破性进展。 1996年Kao等…针对配子体型自交不亲和性(gameto—时间内探讨了离体条件下花柱S-RNase降解花粉管 RNA的特性，一方面为蔷薇科植物自交不亲和性机理 phyticself-incompatibility，GSI)的茄科植物提出了雌蕊 自交不亲和基因(self-incompatibilityallele，S-gene，S基的理论提供实验依据，另一方面也可以为研究S-RNase 因)产物——花柱s—RNase抑制自花花粉管生长的模降解自花花粉RNA特异性的本质奠定基础。 型，认为花粉管进入花柱后，花粉管周围的S-RNase与 1材料与方法 花粉的S基因专一受体发生特异性反应，花柱S-RNase 1．1试验材料 降解自花花粉管RNA，但不降解异花花粉管RNA，从而 表现出SI。进一步研究表明，蔷薇科植物的SI反应也 试材为梨主栽品种“丰水”(基因型$3S5)、“幸水” 适合这一模型[2，3J。梨的大多数品种自花授粉后，花粉 ($4S5)的花柱和花粉，采自江苏省高邮市果树实验场。 管在沿花柱向子房方向生长途中停止生长【4J，不能完 采集开花前1d的大花蕾，分离出花柱和花药。花柱称 成受精结实过程”J。由于在植物活体花柱内，花粉管 量后立即储存在液氮中；花药用硫酸纸包好后放入干燥 与雌蕊s基因产物的相互作用过程受到多种生物因子 器，密封存放在一20℃冰箱中。 的影响，难于检测其与花粉管RNA的生理代谢反应，因 1．2花柱S-RNase和酸性蛋白的提取及活性测定 此，迄今尚未见花柱S-RNase对自花花粉管“毒杀”过 “丰水”及“幸水”梨花柱S．RNase的提取，参照 Hiratsuka等的方法MJ。花柱酸性蛋白质的提取是利用 程的生理生化反应等方面的报道。Hiratsuka等¨1从梨 花柱中分离纯化出了S基因产物，证明梨S基因在花柱 中表达的产物是分子量约30～32KDa的碱性水溶性糖 蛋白(S糖蛋白)，等电点(pI)为9．6～10．1，该S糖蛋