继代时间对棉花遗传转化组织培养中两次愈伤组织褐化死亡高峰影响.pdfVIP

中国棉花学会 年年会暨第八次代表大会论文汇编 ２０１２ 　　　　 　 ８０ 继代时间对棉花遗传转化组织培养中两次愈伤 组织褐化死亡高峰的影响 １ １ １ １ ２ 罗晓丽 ，肖娟丽 ，张安红 ，王志安 ，吴家和  （ 山西省农业科学院棉花研究所生物技术室，山西运城 ； １． ０４４０００ 中国科学院微生物研究所植物基因组学国家重点实验室，北京 ） ２． １００１０１ 棉花组织培养中体细胞胚胎发生和植株再生是棉花遗传转化的基础，当前棉花农杆菌介导转化 棉花技术都是建立在其基础上的。然而棉花体细胞胚胎发生和植株再生的效率均很低，建立在该技 术上的棉花遗传转化效率更低，往往存在组织培养时间长、耗费的成本高、成苗率低和转化率不高等 缺点。这些不足严重地阻碍了棉花遗传转化的应用，这成为棉花在基础研究和应用研究上都落后于 其他大田作物的原因之一。因此有许多研究者致力于提高棉花转化效率的研究。然而，这些研究主 要集中在培养基成分和转化条件等方面的优化，对棉花组织培养中本身生理生化变化的优化和控制 研究较少，如控制棉花褐化死亡和细胞死亡的研究。 在我们的前期研究报道了如下现象：当下胚轴诱导的愈伤组织生长到 周，愈伤组织块直径 ４ ５ ～ 大小为 ，把紧连在下胚轴两端的愈伤组织剥离，转入增殖培养基上增殖。培养 后愈 １２ １５ｍｍ １５ｄ ～ 伤组织出现褐化死亡，褐化从愈伤组织块的边缘开始，逐渐向中央扩展，这是棉花愈伤组织第一次发 生了褐化和 的高峰。当愈伤组织在增殖培养基上继代 次后，愈伤组织开始发生胚胎分化， ＰＣＤ ２ ３ ～ 此时的胚性愈伤组织的质地较为疏松、团状、颜色多为淡黄色或黄色。把胚性愈伤组织转入分化培养 基上，团粒愈伤组织生长 ，在愈伤组织上出现许多褐色的斑点，这是棉花愈伤组织发生了第二 ８ １５ｄ ～ 次褐化和 ＰＣＤ高峰。这些斑点源于死亡的细胞聚集在一起，形成一种木栓结构，但同时这些有褐色 斑点的愈伤组织会出现体细胞胚，即发生胚分化；第二次发生 ＰＣＤ高峰的时期伴随体细胞胚分化，说 明棉花愈伤组织的体细胞胚分化与细胞凋亡存在必然的关系。本研究旨在掌握棉花体细胞培养和胚 胎发生过程中愈伤组织褐化和 ＰＣＤ发生规律的基础上，针对愈伤组织的褐化和死亡来调节愈伤组织 的继代时间，从而控制在棉花遗传转化中两次愈伤组织褐化死亡和 ＰＣＤ 的高峰，大大提高棉花体细 胞的再生效率，为棉花遗传转化效率提高打下坚实的基础。 本研究中，我们对愈伤组织继代时间对褐化死亡程度以及转基因再生植株的时间和再生率进行 细致的分析，结果表明继代时间对棉花愈伤组织两次褐化死亡高峰存在显著的调控作用。在第一次 高峰采取延长继代时间，每次继代时间间隔为 ，连续继代 次，可以显著地降低愈伤组织的