聚合酶链反应在免疫学中的应用.pdfVIP

上海竞疫学杂赢 1991年第 11卷簋 2期 ·125 · 聚合酶链反应在免疫学中的应用 (文献综述) 上海第二医科大学生化教研室分子生物学实验室(上海 200025) 朱适项 陈诗书 聚合酶链反应 (PolymeraseChainReac- 72C 1～ 3m in。 tJon，PCR)是近年发展起来的一项新技术。 上述三个步骤组成一个循环，每循环一 应用该技术可 以在上万个基因或表达产物中 次，DNA分子数按指数倍增，即 2n，若循环 挑选出所需要的基 因，它在试管中经数小时 次数 n=25，可达百万倍 以上。1988年 Tsq 后即可扩增成上百万个 同一基因分子，供进 DNA 聚合酶的应用使 PCR 技术得 到更迅 一 步分析 ，所 以PCR 被看作是一种无纽 胞 速的发展和广泛应用。该酶是 自温泉耐高温 的分子克隆技术。它具有快速、灵敏和特异 细菌 Thermusaqua~icus(Taq)提取的，在 性强的特点。该方法 问世 以来 ，几年 同 95。c下经 40rain仍保留 5O 的活 性 ，最 已被广泛应用于生物学和医学包括免疫学的 适反应温度为 70~75。C。该酶 的应 用 解 央 许多领域。 《80ieⅡce杂志编辑部把 PCR评 了反复扩增循环 中周高温而致酶变性带来的 为 1989年最有影响的一项技术发明 ]。 困难。下面扼要介绍 PCR 技术在免疫学 中 一 ， ]FOR 的基本原理和步 骤 PCR体 的应用。 外基因扩增方法是根据体内DNA 复制的基 二、免疫相关基因结构分析， 本原理而建立的。在扩增某一个基因并对它 免疫相关基因，尤其是 Ig超基因族 (Ig 进行研究时，首先需经化学合成两个分别与 Supergenefamily)是一粪非常复杂 的遗传 该基因两倒 DNA顺序互补的寡聚脱氧核苷 系统，用传统方法对染色体基因组DNA进行 酸引物 ，长度为 20~30个核苷酸残基，在引 研究有相当难度 ，但应用 PCR技术，由于 目 物的5端可以添加与模板顺序 不相互 补 的 的基因被扩增上百万倍 ，大大增强信号 ，若配 序列，如限制性 内切酶的接头或启动子的顺 合适当的限制性 内切酶，无需用放射性 同位 序 ，便于 PCR 产物的进一步克隆或表达 之 素即可直接分析基因结构。也可以配合顺序 用。然 后 在 DNA 聚合 酶催 化下 以四种 特异性寡核瞽酸 (SSO)探针进行基因检测， dNTP为原料，合成与模板 DNA 顺序完全 还可以直 接用 PCR法进行 DNA顺序 分 相 同的新的 DNA。反应过程 由以下三 个步 析 ，整个过程只要两天左右即能完成，较传 骤组成t 统的M 13系统法大大简化。PCR法所需样 (一)变性 (Denaturation)：将所要扩增 品量甚微，如一根毛发、一个精子、少许绒毛、 的基因片段加热 (94’030日)，使 双 链 DNA 一 清血，或福尔马林固定、石腊包埋 以及冷冻 饵离成单链 DNA。 数万年的组织都可用于基因结构分析 (=)遇火 (AnneaIing)：当温度下 降 (一)ⅡLA 基因多态性 的研 究：ⅡL^ 时，化学合成的引物即与其互补的DNA顺