大肠杆菌感受态细胞转化能力影响因素的研究.pdfVIP

维普资讯 安徽农学通报，AnhuiAgri．Sci．Bul1．2007，13(16)：23—24 大肠杆菌感受态细胞转化能力影响因素的研究 纠 敏 汪伦记 张 敏 (河南科技大学食品与生物工程学院，河南洛阳 471003) 摘 要：探讨了大肠杆茵生长状态、转化溶液浓度、保存温度、冰上放置时间对感受态细胞转化能力的影响。结果表 明，以100mmol／LCaC12为缓冲液，采用经活化培养的A6000、56的大肠杆茵JM109制备的感受态细胞，在冰上放置6h 后转化，所得转化率最高。若感受态细胞要保存备用，液氮保存最好 ，其次 一70℃，添加 20％甘油利于冷冻保存，但添 加保护剂对转化率有抑制作用。 关键词：大肠杆茵；感受态细胞；转化 中图分类号 Q939、1 文献标识码 B 文章编号 1007—7731(2007)16—23—02 Studyon theFactorsAffectingTransformationAbilityofCompetentEscherichiacoliCells JIUMin，WANGLun—jl，ZHANGMin (FoodandBioengineeringInstitute，HenanUniversityofScienceandTechnolo— gY，Luoyang，471003，China) Abstract：Severalfactors includingEscherichiacoligrowthstatus，transformationsolutions，freezingstabilizers nadstorage durationwereevaluatedfortheireffectsonthetransfomr ationabilityofcompetentEscherichiacolicells．Theresultssugges— tedthatthehighesttransfomr ationabilitycanbeobtainedwhenEscherichiacoliJM109wasculturedtoanA6000f0．56，pre— paredwith100mmol／LCaC12，andkeptoniceofr6hbeforetransfomr ation．Asastabilizerofrfrozencompetentcells，the temperatureof liquidnitrogenbetterthanotherthreetemperature、20％ glycerolwasofundtobebetterthan10％ DMSO， however，bothof them inhibitedtransfomr ation． Keywords：Escherichiacoli；competentcells；transfomr ation 在分子生物学越来越普及的今天，基因操作技术 已成 min振荡培养过夜。取 0．5ml培养物，放入含50mlLB培 为重要的常规操作技术。感受态细胞的制备和转化是分 养基的锥形瓶中，继续振荡培养 ，从0时起每隔一定时间 子生物学试验中频繁使用的一项重要 的常规操作 ，可用于 取样测定菌液的OD 值，制备感受态细胞，测其转化率。 基因克隆以及文库构建等研究。 1．4 保存温度影响的比较 把制备好的感受态细胞分别 制备感受态细胞最常用的方法是 CaC1法 。但在 放于4℃，一20℃，一70℃冰箱和液氮罐 (一196℃)中保 试际操作中其转化率较低，常常不能满足试验的要求。目 存，每隔一定时间取出 1份转化，测定转化效率。 前 ，实验室中常用的感受态细胞多为公司直接提供 的，其 1．5 不同转化溶液的比较 对 比25mmolfL、50mmol／L、 价格昂贵，不适于普通基因克隆操作中的频繁使用。另