2010研究生第三讲.pptVIP

《发酵工程》第三讲内容 一、生产菌种的扩大培养 7、发酵生产的无菌接种 8、种子制备过程举例 二、发酵过程的工艺控制 1、氧对发酵的影响及其控制 2、CO2浓度对发酵的影响及其控制 3、泡沫对发酵的影响及其控制   一、生产菌种的扩大培养7、发酵生产的无菌接种 生产规模发酵罐的接种，包括两个方面： 从实验室摇瓶或孢子悬浮液容器中移种入一个 种子罐， 从一个种子罐移入另一个生产发酵罐中。 从实验室摇瓶或孢子悬浮液容器接种：压差法 从种子罐接种到发酵罐 发酵的过程实质上是在分子水平的遗传特性，细胞水平的代谢调节和工程水平的传递特性三个不同水平上发生调控的。发酵过程受到多因素交叉的影响控制具有不确定性和复杂性。 1、氧对发酵的影响及其控制 在好氧深层发酵中，氧气的供应往往是发酵能否成功的重要因素之一。对多数好氧发酵来说，氧的不足会造成代谢异常，产量降低，氧气被称为好氧微生物发酵的限制因素。 1.1 氧的特性和传质： 在28℃100％的空气饱和浓度情况下，氧在发酵液中只有0.25 mmol.L-1左右，比糖的溶解度小7000倍。在对数生长期即使发酵液中的溶氧能达到100％空气饱和度，若此时中止供氧，发酵液中溶氧可在很短时间内便耗竭，使溶氧成为限制因素。 因此，发酵过程中需连续不断通入无菌空气，以满足微生物的生长，通常情况生物氧化中氧吸收效率多低于1%，99%的无菌空气浪费。 1.2 微生物对氧的利用： 不同微生物对氧的需求不同。微生物对氧的利用可由以下关系式进行计算。 微生物的耗氧速度常用比耗氧速率来表示：即单位质量的细胞（干重）在单位时间内消耗氧的量（呼吸强度）。 （1） QO2 =(QO2 ）max × CL /(K0 +CL ） QO2比耗氧速率(mmol O2/g菌·h)，CL溶解氧浓度， K0氧的米氏常数（ mol/ m3 ），(QO2）max 最大比耗氧速率(mmol O2/g菌·h )： 啤酒酵母为：2.2 ×10-3，黑曲霉为： 8.3 ×10-4 （2）摄氧率： γ= QO2 X γ摄氧率（mmol O2/L·h） ：单位体积培养液在单位时间内消耗的氧量。 X细胞浓度，kg(干重)/m3。 临界氧浓度： （3）CCr临界氧浓度：指不影响菌的呼吸所允许的最低氧浓度。 注意： 细胞浓度直接影响培养液的摄氧率，在分批发酵中摄氧率变化很大，不同生长阶段需氧不同，对数生长后期达最大值。 培养基的成分和浓度显著影响微生物的摄氧率，碳源种类对细胞的需氧量有很大影响，一般葡萄糖的利用速度比其他的糖要快。 空气→气膜→气液界面→液膜→液相主体→细胞或细胞团表面的液膜→固液界面→细胞团内的传递→细胞壁阻力→反应阻力 传递过程的总推动力就是气项与细胞内的氧分压之差，当氧的传递达到稳态时，总的传递速率与串联的各步传递速率相等。 以单位体积的液体中所具有的氧的传递面积为 α (气液比表面积m2/m3) OTR=KLα (C* –CL ） OTR单位体积培养液中的氧传递速率， KLα以氧浓度为推动力的容积氧传递系数， C*与气相氧平衡时液相氧浓度（ mol/ m3 ） 1.4.2影响发酵罐供氧因素 1.4.2.1 搅拌：搅拌功率增大对氧的利用效果明显，但过于激烈的搅拌，产生很大的剪切力，可能对细胞造成损伤。另外，激烈的搅拌会产生大量的搅拌热。增加传热的负担。 KLa =K(PG/V) αωsβ K常数， PG搅拌功率，V培养液体积， ωs通气的表观线速度，α ，β为指数，六箭叶涡轮：α：0.755， β：0.578 1.4.2.2 空气流量： Kla随着空气流量的增加而增加，但通气量的影响是有一定限度的，如果超过在一限度，搅拌器就不能有效的将空气泡分散到液体中，而在大量的空气泡中空转，发生“过载”大的气泡沿周围逸出。 1.4.2.3 培养液性质的影响：在发酵过程中，培养基的性质如：密度、黏度、表面张力、扩散系数等都会影响KLa 在其他条件相同时，液体的黏度增大时，传质阻力就增大。 1.4.2.4 微生物生长的影响：细胞浓度增加， Kla值逐渐变小 1.4.2.5