乙肝病毒感染肝星状细胞的体外的研究.pdfVIP

降低的原因之一；二，耶V转基因小鼠免疫系统处于对船V的耐受状态，没有肝组织的病理损伤，只是耶V 携带者的良好模型，对于乙肝携带者，拉米呋啶难以取得持续应答，可能导致HBvDNA下降不明显；本次 结果还提示拉米呋啶是在基因水平而非蛋白水平抑制病毒复制。苦参素注射液与苦参素胶囊主要成分相 同，都是氧化苦参碱，临床应用已经发现两者具有一定的抗HBV作用，但是两者的抗病毒能力是否存在差 是苦参素注射液的抑制病毒复制与HBsAg表达能力强于苦参素胶囊，两者之间比较具有显著性差异，只是 苦参素注射液用药不便，患者不易耐受，不利于临床长期用药。肝炎灵注射液是从山豆根的根茎中提取的 有效成分，主要含有苦参碱，亦能使损伤的肝组织的变性和坏死程度减轻，促使肝细胞再生与修复，降低 转氨酶吲，并有一定的抑制HBV复制和增强免疫功能等作用旧1；本研究发现肝炎灵注射液组小鼠肝组织 参素注射液、苦参素胶囊与肝炎灵注射液对HBV转基因小鼠可以在基因水平抑制耶V—DNA复制，进而抑制 蛋白合成，他们的抗病毒能力由强到弱依次足肝炎灵注射液，苦参素注射液，苦参素胶囊，并且提示这几 种常用苦参类制剂可能对高病毒血症的HBV携带者具有一定的抗病毒作用，但是它们的作用机理尚待进一 步研究。 乙肝病毒感染肝星状细胞的体外研究 王 宇 首都医科大学附属北京友谊医院肝病研究中心(100050) 摘要 背景和目的慢性乙型肝炎是我国常见的慢性传染病之一，最终可导致肝硬化和肝癌，严重威胁我 stellate 国人民的健康。肝纤维化是慢性乙型肝炎导致这些后果的共同病理基础，而肝星状细胞(Hepatic Cell，HSC)的激活是纤维化发生的中心环节。根据目前的肝纤维化理论，星状细胞的激活是多种细胞因 B 子的作用结果，而乙型肝炎病毒(Hepatitis virus，HBV)对细胞似乎没有直接作用。但本实验室曾发 现船V在体外能直接促进肝星状细胞系Lx一2细胞的增殖；耶V对LX一2细胞I型胶原mRNA和蛋白的表达 也有明显的促进作用。另外，临床和流行病学研究也提示，乙肝病毒载量与慢性乙肝的预后有明显关联。 另外，考虑到HBV具有泛嗜性，所以我们假设HBV有可能直接感染HSc、并激活该细胞。因此，本研究将 着重探讨HBV能否体外感染Lx一2细胞，以期为阐明慢性乙肝的致病机理提供新的实验依据。 一浓度的感染时间均为24、48和72小时。按照观察时间点收取细胞，进行以下检测。 2．透射电镜和胶体金标记(单克隆乙肝表面抗体、多克隆的乙肝核心抗体)免疫电镜观察细胞内是否存 chain 在病毒颗粒及特异性结合的金颗粒。3．用荧光定量多聚酶链反应(P01ymerase 方法测定细胞内的HBVDNA和共价闭合环状DNA(cccDNA)；用斑点杂交(Dotblot)和Southernblot方 法测定细胞内是否存在病毒复制中间体；用斑点杂交和Northernblot方法测定细胞内是否存在病毒复制 ·200· 显色)测定HBV在细胞内是否表达乙肝表面抗原(HBsAg)和乙肝核心抗原(HBcAg)。 结果1．．透射电镜下，在Lx一2细胞中没有发现完整病毒颗粒。但在少数细胞内，可见少量类病毒颗 胶体金标记的免疫电镜下，Lx一2细胞的胞浆和胞核中发现了直径5nm和20nm胶体金颗粒。颗粒数量较少， 别为2．58拷贝／细胞和O．86拷贝／细胞。用斑点杂交、Southernblot和Northernblot方法没有检测到Lx一2 细胞中存在HBV复制中间体及mRNA；而在慢性乙肝患者肝组织中检测到阳性条带。原位杂交检测船、，DNA 细胞中有少量棕黄色颗粒，位于胞浆中；慢性乙肝患者肝组织中可见大量棕黄色颗粒。 结论1．在体外培养中鹏V可能进入了星状细胞，这种进入可能与细胞吞噬有关。2．现有证据不能 证明HBV在LX一2细胞内进行DNA复制和抗原表达。 关键词乙型肝炎病毒(船V)，肝星状细胞，感染，复制，体外 中西医结