淮南麻黄鸡MHCⅠα链基因的克隆及序列分析.pdfVIP

动物医学进展 ，2015，36(2)：34—38 ProgressinVeterinaryM edicine 淮南麻黄鸡 MHC工 链基因的克隆及序列分析 戴 银 ，王承志 ，沈学怀 ，赵瑞宏 ，胡晓苗 ，侯宏艳 ，潘孝成 ，周学利 ，张丹俊 (1．安徽省农科院畜牧兽医研究所 ，安徽合肥 230031；2．安徽农业大学动物科技学院，安徽合肥 230036) 摘 要 ：典型的主要组织相容性复合体 (MHC)是抗原递呈的关键分子，具有重要的免疫功能，与多种疾 病密切相关。为深入 了解地方品种鸡 MHCI类 a分子的特征 ，尤其是抗原结合区域的特点，通过 RT-PCR 技术获得 了29个淮南麻黄鸡完整的 a链基因，并进行 了分析 。结果显示，淮南麻黄鸡 MHC 工a分子高度多 态，但主要集中在a1和 2区域 ，该 区变异氨基酸位点共 68个 ，其中高度变异22个。淮南麻黄鸡 MHC工分 子 d1和 a2区域氨基酸序列同源性介于79．396／～99．5 之间，仅少部分序列完全一致。鸡氨基酸序列同源 性与鸭较 高，介于 57．6 ～64．1 之间；其次为人和 鼠。进化分析显示，淮南麻黄鸡 MHC1分子 a1和 a2 区域分属于两个类群 ，但未显示明显的品种差异 。此外，鸡与鸭的亲缘关系较近，与其他物种则遗传距 离较 远。研究结果表明，淮南麻黄鸡 MHc分子在进化过程 中呈现高度的多态性，但受到病原体的选择压力，多 态性主要位于抗原肽结合部分 的 a1和 d2区域 。 关键词：MHC工类分子 ；序列分析；淮南麻黄鸡 中图分类号：$858．31；Q785 文献标识码 ：A 文章编号：1007—5038(2015)02—0034—05 主要组织相容性复合体 (majorhistocompati— 胞 ，诱导机体产生细胞性免疫应答 。我 国优 良的地 bilitycomplex，MHC)具有辨别 自身与非 己的独特 方鸡 品种较多，各有优势，然而目前仍然没有一个完 功能，同时又直接参与抵抗病原体入侵及 自身稳定 善的保持和改进品质的培育系统，MHC工作为抗病 的过程 ，因而在脊椎动物进化 中扮演着不可替代的 育种的关键基 因之一 ，仅少数几个 国内外鸡 品种有 重要角色_l1]。由于 MHC的表达产物广泛参与各 相关报道 ；同时家畜禽在饲养过程中主要受人工干 种抗原的识别，其遗传背景的差异可导致不同个体 预和传染病原侵扰 ，与在 自由环境 中的生物有所不 抗病能力及 自身免疫疾病易感性 的差异 ，目前 已证 同，那么 MHC基 因的进化特 点是否也有所差异 。 实，MHC与人类和动物的多种疾病之 间相关_3]。 为此 ，克隆安徽省地方品种淮南麻黄鸡 MHC工分子 由于 MHC突出的特性和其在免疫遗传学和群体遗 的eDNA基因，并分析其分子特征，尤其是 a1和 a2 传学领域中的重要作用 ，已被作为抗病育种遗传标 区域的遗传特点，初步探索 MHC工分子与疾病之间 记辅助选择 的重要位点 ]。另外，有报道表 明， 的关系，为下一步分子育种及制备基因工程疫苗提 MHC除了与某些疾病密切有关 ，而且还与畜禽 的 供理论依据 。 繁殖性能、生长性能及肉质都存在一定的相关性 ，因 1 材料与方法 此充分研究 MHC的特性 ，并利用该基 因培育 出高 1．1 材料 产、抗病力强的家畜品种极具发展潜力[gqo]。MHC 1．1．1 试验用动物 试验鸡为安徽省地方品种淮 工类分子是一种膜结合糖蛋 白，由重链 (a)和轻链 南麻黄鸡 ，35只，210 日龄，来源于安徽省农业科学 (J3z)微球蛋 白两部分 以非共价键结合组成。成熟 院实验基地 。 的Ct链 由3个胞外 区域 (al、a2、a3)及转膜区域和胞 1．1．2 菌株和质粒 大肠埃希菌 BL21和载体 质尾区组成 ，其中a1和 a2区是 MHCI类分子抗原 pMD18一T为宝生物工程 (大连)有限公司产品。 多态性的分子基础 ，多态性主要体现在该 区。抗原 1．1．3 工具酶和试剂 DNAMarkerDL2000、T4 多肽结合区位于a1和 a2区域，可与病毒、肿瘤细胞 连接酶为宝生