猪TTF-1基因的定位和组织表达谱分析.pdf

2010中国博士后生命科学学术论坛 猪TTF．1基因的定位与组织表达谱分析 王颖1，徐宁迎 factor [摘要]甲状腺转录因子1(Thyroidtranscriptionl，TrF．1)在甲状腺胚胎发育的过程中起至 关重要的作用，另外，它的器官特异性在人类甲状腺、呼吸系统及一些其他神经内分泌器官来源肿瘤的诊 断和鉴别方面具有显著的应用价值。本研究利用辐射杂种克隆板(ImpRH)将猪rn■l基因定位于SSC7q22， 连锁标记为NFKB(LOD值11．89)和SWl959(LOD值5．65)；应用real-time Q-PCR方法研究了11下．1 在金华猪16种组织中的表达谱，结果表明：TrF．1基因在甲状腺中表达量最高，肺其次、垂体次之，其他 组织基本不表达。此项研究为进一步研究11Rl对猪的生长发育及肉质性状提供了重要的分子基础。 [关键词】猪：TTF．1；定位；组织表达谱 factor l，TTF．1)，又被称为甲状腺特异性增强 甲状腺转录因子1(Thyroidtranscription 结合蛋白(Thyroid．specificenhancer-binding 最初表达在甲状腺，故命名为甲状腺转录因子．1。它是同源结构域转录因子家族中的一员， 选择性的活化甲状腺、肺、及人脑特异区域相关基冈的表达【lJ。人的TTF．1基因位于人染色 体14q13，起先的研究表明它由2个外显子和1个内含子构成【2】，随后的研究证实人类1trF．1 基因m3个外显子和2个内含子构成[31。rrF．1具有2个独特转录活性的结构域：一个位于N端 第51-123个氨基酸残基之间，另一个位于C端第295～372个氨基酸残基之间，两者都通过 融合到DNA结合位点而发挥作用【4l。TTF．1是由一个371．378个氨基酸组成的多肽链，分子质 量大约在38-42kDa。人类【2】、大鼠【5】和小鼠【6】的氨基酸序列有98％的同源性，并在第160220 个之间有m60个氨基酸组成的具有绝对保守性的同源序列。TTF．1基因的mRNA序列全长约 1．1kb，基因全长约3．2kb。研究表明，TTF．1是一种分子量为38kD的核蛋白，而TTF—l的DNA 结合域是一个新的哺乳动物同源结构域，它与果蝇的NK-2同源结构域有82％的同源性17J。同 源结构域转录因子家族在胚胎的发育和分化方面起着重要的调控作用岱J。 猪的生长发育和肉质性状的遗传机制一直以来都是动物遗传育种的热点领域，培育生长 速度快，肉质良好的猪种对于提升我国养猪业水平，提高人民生活品质都具有极为重大的意 义。众所周知，甲状腺激素的作用遍及机体各处，几乎机体的每个细胞都是甲状腺激素作用 的靶细胞，其可以促进组织分化、生K和成熟，促进物质与能量代谢。而甲状腺激素合成的 相关重要基冈是否会对猪的生长发育造成影响仍有待于进一步研究。此项研究就是从甲状腺 激素合成的重要调控因子TTF．1入手，研究该基因在猪染色体上的定位情况及其组织表达谱 和发育表达谱，进而为猪的生长发育及肉质性状提供分子基础。 基金项目：国家自然科学基金项目． 203 工颖，等：猪丌F．1基冈的定位．与组织表达潜分析 1材料方法 1．1DNA样品和eDNA模板 屠宰并收集金华猪心、肝、肺、肾、甲状腺、脑、下丘脑、垂体、眼肌、皮脂、腹脂、 胃、大肠、小肠、胰、后腿组织及血样。DNA为血样提取，其他组织分别提取总RNA，反 车)!=录得到cDINA，．20℃保存备用。 1．2引物设计 以金华猪基因组DNA为模板，扩增相应的内含子，PCR反应扩增长度和退火温度(见 表1)，扩出相应目的条带后，经纯化，TA克隆后送去测序。 根据猪们吓．1基因mRNA序列(本实验室所克隆)，并选择猪肌动蛋白p(beta．actin， ACTB) 引物信息见表1)。 表1猪TTF-l基因的定位和表达信息 1．3扩增反应 PCR反应体系为15山：10x扩增缓冲