叶绿体遗传转化技术的研究进展和应用于杂交水稻机械化制种的初步探索.pdfVIP

·332· 叶绿体遗传转化技术的研究进展及应用于 杂交水稻机械化制种的初步探索 李丁1，谢灵灵1，崔玲玲2，严礼2，左佳1，贺荣华1，赵迎曦2，曹孟良34 (1．中南大学研究生院隆平分院，湖南长沙410125；2．湖南隆平高科基冈科技有限公司，湖南长沙410125； 3．国家杂交水稻工程技术研究中心，湖南长沙410125) 摘要：叶绿体转化足继核转化之后在基因工程研究中出现的新热点。叶绿体转化具有表达高、可同时进行多基因转化、无基凶 沉默现象等许多优点。概述r植物叶绿体基因组特点、遗传转化技术原理以及最近研究进展，并时其应用于杂交水稻机械化制种 做了初步探索。 关键词：杂交水稻；叶绿体转化；机械化制种 中图分类号：S511．038；Q945．1l文献标识码：A 文章编号：1005—3956(2010)so一0332一06 DNA存在于高等植物的细胞核、叶绿体‘j线粒出现转基因沉默的现象，外源蛋白的表达量更高；可 体中。叶绿体在进化I二源于内共生细菌，其基因组 同时进行多种外源基因表达，这类似于原核体系中 结构与功能具有典型的原核生物的特点，大部分基 的多顺反子结构；由于它具有母性遗传的特性，整合 因以多顺反子的形式存在，调控元件、启动子、转录 的目的基因不遵循孟德尔遗传规律，即在后代中不 终止序列、核糖体RNA等结构也与原核生物非常相 出现性状分离，故转基因可在子代中稳定地遗传和 似。叶绿体是外源基因表达的理想的场所，外源基 表达，可有效地避免外源DNA在田间扩散污染。 因的融入需通过叶绿体基因组中的侧翼序列与叶绿 2叶绿体遗传转化的原理 体载体上侧翼序列发生同源交换。目前已对30多 种植物的叶绿体全基因组完成测序工作…。一些 2．1 叶绿体基因组结构 作物的叶绿体基因组已被稳定地整合人外源基因， 叶绿体基因组一般由环状双链DNA组成，但有 些具有二聚体、三聚体等结构，机理尚不清楚，大小 例如花椰菜、棉花、水稻、卷心菜等。它们获得了相 kb至220 关的农艺性状，包括除草剂抗性、抗病虫害、抗旱和 范围从120 kb不等。不同的陆生植物叶 绿体基因组通常包含一段高度保守的区域，该区域 耐盐等(表1)。此外叶绿体基因工程在医学研究领 内含2段反向重复的序列即侬。与肷。，它们呈反向 域也扮演着重要角色。有报道指出将叶绿体作为生 重复。这2段反向重复序列之问发生重组，形成短 物反应器研制出蛋白质，包括胰岛素、干扰素、生长 单拷贝序列(smallsinglecopy)。叶绿体基因组的其 激素等。 余部分则是长单拷贝序列(1argesinglecopy)。 1 叶绿体遗传转化的优点 2．2转化原理 质体转化目前一般通过基因枪的方式将外源基 叶绿体早在20世纪60年代初期被发现，但是 因打入细胞中，或者对原生质体进行聚乙二醇 直到80年代末期，Boynton等12o才首次报道成功转 (PEG)处理后，通过浸泡等方式将外源基因导人宿 化衣藻叶绿体。尽管该领域起步较晚，但其较核转 主细胞，但后者的转化效率较低。通过RecA系统 化具有更多的优势，故受到广泛关注。叶绿