IPTG诱导浓度时问及温度对重组促性腺激素释放激素基因表达的影响.pdfVIP

《黑龙江畜牧兽医)2006年第8期 17 IPTG诱导浓度、时问及温度对重组促性腺激素 释放激素基因表达的影响 金元昌 ，刘 利 ，苏晓艳 ，李景鹏 ，李会东 ，周建红 (1．广西大学 生命科学与技术学院，广西 南宁530004；2．湖南科技大学 生命科学学院，湖南 湘潭411201； 3．贺州学院，广西 贺州 542800；4．湖南科技大学 附属医院，湖南 湘潭 411201； 5．东北农业大学 生命科学学院，黑龙江 哈尔滨 150030) 中图分类号：Q786 文献标识码：A 文章编号：1004—7034(2006)08—0017—03 关键词：促性腺激素释放激素；诱导浓度；外源蛋 白；表达 摘 要：以人工合成的促性腺激素释放激素(gonadotropinreleasinghormone，GnRH)／转运肽(TRS)基 因与表达载体pGEX一6p一1相连的重组子(pGE—G)作为研究对象，转化大肠杆菌BI21(ED3)plyS。 利用IPTG作为诱导剂，分析比较不同IPTG诱导条件对于表达产物的影响，以确定最佳 IPTG诱导条 件。结果表明：融合蛋 白大部分以包涵体的形式存在 ，诱导温度为 30℃；IPTG浓度为0．2mmol／L 时，可溶性融合蛋白GST—GnRH／TRS表达量最大。光密度扫描对表达产物进行初步定量，表明表 达产物约 占菌体总蛋 白的33．3％。 IPTG为异丙基硫 一D一代半乳糖苷，是I8一半 公司；酵母提取物、胰蛋 白胨、低熔点琼脂糖，购 自北 乳糖苷酶底物的类似物，有很强的诱导力，在有 IPTG 京原平皓生物工程公司。其他试剂均为国产分析纯。 诱导物存在的条件下，诱导物可与阻遏蛋 白结合成复 1．3 主要仪器 合物，而使阻遏蛋 白构象发生改变，阻遏蛋 白就不能 高速低温离心机 (美国，Beckman)，电子分析天 再与O基因结合，从而促进基因表达。促性腺激素 平(瑞士，MettlerToledo)，移液器(法 国，Gilson，德国， 释放激素(GnRH)为下丘脑神经元分泌的十肽激素， Eppendorf)，一20℃冰柜(海尔)，一70℃冰柜(日本， 下丘脑的GnRH分泌呈典型的脉冲式释放，这是成熟 Sanyo)，电泳仪 (美 国，Bio—Rad)，高压灭菌锅 (13 动物的特征，对于性周期的形成是至关重要的，下丘 本，Sanyo)，超纯水器 (英 国，UVP)，凝胶成相仪(美 脑 GnRH脉冲式释放模式的丧失将导致闭经。。。试 国，Millipore)，直流电泳仪(DYY一111型，北京六一仪 验 以IPTG不同浓度、不同诱导时间和不同诱导温度 器厂)，超净工作台(FromaScientific1829．SN．17069 对重组GnRH基因进行诱导表达 ，以研究 IPTG诱导 — 15)，紫外分光光度计 (日本，uV一120—02)，pH 浓度、时间及温度对重组 GnRH基因表达的影响。 计 (pHS一3C型，上海雷磁仪器厂)，电热恒温水槽 1 材料与方法 (DK一80型，上海精宏实验设备有限公司)，高速台 1．1 工程菌 式离心机(TGL一16型，上海医疗器械六厂)，低速离 质粒pGEX一6p一1，东北农业大学生命科学学 心机(LD4—2型，北京医用离心机厂)，水浴摇床 院基因部保存；受体细胞JM109及BI21(DE3)plyS， (HZS—D型，哈尔滨市东联电子技术开发公司)，垂 购 自PROMEQA公司；重组促性腺激素释放激素／转 直板电泳系统(DYY一111型，北京六一仪器厂)等 运肽基因的工程菌pGE—G，东北农业大学生命科学 1．4 方法 学院基因部构建。