应用FA及PPA—ELISA技术对猪瘟的检测.pdfVIP

维普资讯 动物 医学进 展 ，2003，24(5)：114—116 Progressin VeterinaryM edicine 应用 FA 及 PPA—ELISA技术对猪瘟 的检测 潘树德 ，何利 昆，李学俭 ，马兴元 (沈 阳农业大学畜牧兽 医学 院，辽宁沈 阳 110161) 中圈分类号：$852．651 文献标识码 ：B 文章编号 ：1007—5038(2003)05—0114—03 摘 要 ：用免疫荧光抗体诊 断技 术及单克 隆抗 2 方法 体纯化酶联免疫吸 附试验诊 断技术对疑为猪瘟 2．1 免疫荧光试验 病毒感染猪进 行 了检测 ，重点 阐述 了2种方法的 2．1．1 组织切 片 的制作 用病猪 的肾脏作为标本 ，首 技术原理和操作过程 。通过用免疫荧光抗体诊 先擦净两张载玻片并用蜡笔作好 正反面 的标记 ，用手术 断技术检测 了5份病料 ，其 中有2份 为 阳性 ，阳性 刀从 肾脏 中切取1cm。大小 的规整组织小块 ，接下来用 率为4O ；用单克 隆抗体纯化酶联免疫吸 附试 冷冻切 片机所配带 的6 明胶使组织小块 与切 片机 的可 验诊断技术检测 了猪瘟血清抗体 ，在4O头母猪 移动载物台相粘边 ，放人切 片机 内预冷5～6min，当切 片机 内的温度下 降到一1O～一2O℃左右 时可先修整组 血清样 品中，猪瘟弱毒抗体效价 OD值较 高，有 织块使之切面保持平整 ，然后调整切 片机切 片厚度为4 100 的保护率 ，但 是发现母猪群 中有 1O 隐性 m 即可开始切 片 ，切 出的组织薄片可直接用载玻片贴 猪瘟感染，其强毒抗体效价 OD值大于0．5，体 内 附粘取下来 ，置室温 下使之 自然干燥 。 带有猪瘟病毒 。结果及过程表 明此 两种诊 断方 2。1。2 组织切 片的 固定 将 干燥好 的切 片放 人有 固定 法检 测快速 、鉴别准确、分辨率高。 液 的染色缸 中固定 15min，然后取 出使之风干后立 即染 关键词 ：猪瘟 ；猪瘟病毒 ；免疫荧光抗体诊断技 色 。如果不 能立即染色 ，可先将 片子作密封冰冻保存 ，一 术；单克隆抗体 纯化酶联免疫吸附试验技术 般在 一27℃可保存73~87d。 ‘ 猪瘟是猪最重要 的传染病之一 ，不 同 日龄、性别和 2．1．3 组织切片 的染色 将准备好 的猪瘟荧光抗体工 品种 的猪均 能感染导致发病 ，具有强传染性和高致死率 作液用注射器 吸取 出来滴加到 固定好的组织切片上 ，并 的特 点，是严重威胁世界养猪业 的一大疫病 。虽然我 国 使工作液覆盖整个组织块 ，放人到湿盒 中，置 37℃培养 从5O年代起应用猪瘟疫苗进行免疫接种 ，但时至今 天还 箱 中作用40min，之后取 出用 PBS缓冲液浸洗 3次 ，分 普遍存在 ，仍是我 国防疫检疫部 门工作 的重点 。 别于2、5、8min更换 PBS缓冲液 ，最后用蒸馏水冲洗一 猪瘟的实验室诊断可分为检查病毒抗原 、病毒分离 次取 出，放置室温 中半干 时 ，即可镜检 。 和检查特异性抗体3种形式 。免疫 荧光抗体技术 (FA)是 2．1。4 镜检 先在组织切片 上滴加 PBS缓 冲甘 油 ，选 对猪瘟病毒直接检测 ，具有快速 、准确 、特异性好 的特 用4O×油镜观察 ，如果在镜下 观察到组织 细胞轮廓清 点 ，而酶联免疫 吸附试验 (ELISA)可 以通过检测猪瘟抗 晰 ，且在 肾曲小管上皮细胞 的胞浆 内呈现明亮 的翠绿色 体来做 出诊断，而且能够 区别疫苗毒和强毒产生 的抗体 荧光 ，则可判为 阳性 ，若荧