探索鸡白痢沙门氏菌分离株的耐药性.pdfVIP

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2017-08-12 发布于重庆
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探索鸡白痢沙门氏菌分离株的耐药性.pdf

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1 1.1 2007 33 1.2 LB tryptone 10g yeast extract 5g NaCl 10g 1000mL pH 7.2Oxoid 1.3 Ex TaqDNA Fragment Purification Kit Agarose Gel DNA Purification Kit MiniBESTBacterial Genomic DNA Extraction Kit DNA markerTaKaRaPCRdNTPPromegaAmpicillin IPTGX-gal Roche Tryptone Yeast extract Oxoid NaAc SDSEDTASigmaQiagenpGEM- Teasy Vector Promega15DNA 2 2.1 (Kirby-Bauer K-B 16-24h LB 0.5 15 LB 37 18~20h 2.2 2.2.1 DNA 20h 3×109CFU/mL 100 10min4 10000rpm 10min1μL PCR 2.2.2 PCR 3sul1 sul2 I 2.2.3 PCR PCR25μL 1.0 μM20μM 1× Taq 1.5 mM MgCl2200μM dNTP dATP dCTP dGTPdTTP 0.025 U/μL Taq Ex Taq 1 μg DNA 25μL PCR sul1-F/R 94°C 5 min 94 30s 52 30s 72 60s 30 72 7min sul2-F/R 94°C 5 min 94 30s 55 30s 72 50s 30 72 7min 5’CS/3’CS PCR TouchDown PCR 94 5 min 94 45s 61 1 45s 72 90s 5 94 45s 56 45s 72 90s 30 72 10min PCR1% 2.2.4 50μL PCR Takara DNA Fragment Purification Kit 25μLT-A2×Rapid ligation buffer 5μL pGEM-T easy Vector 1μL PCR 3μL T4 DNAligase 1μL 6h 4 5μL DNA50ng 200μL DNA National Center for Biotechnology Information NCBI BLASTnDNA 3 3.1 33 94% 91% 61%58% 88% 64%61% 52%48% 331285% 3 66% 427 16 3.2 18PCRsul1sul218 31800bp 824 bp NCBI 98%-99% 18 30018sul1 sul2 PCR 3.3 181717/18 94.4% 2 0.7 kb1.6kb 0.7kb1.6kbaadA5 dfr17 616191.6kbIaadA5 4 , [2 3 6 7] 33 33366% 5612% 90 90% 94.4% 39% 33 18 54.5% sul1 I I sul2 sul3 94.4% sul1 sul2 94.4% I 88.9% sul1 181 sul1 sul2 I sul3 3 1.6kb I aadA5 dfr17 6 3 aadA5 3 aadA1aadA2StrA-B I wzlb-6.html