肺炎支原体肺炎的诊断方法.pdfVIP

肺炎支原体肺炎诊断方法 广州健仑生物科技有限公司 肺炎支原体肺炎是由肺炎支原体引起以间质病变为主的急性肺部感染，由于此类肺炎在 临床表现上与肺炎链球菌等常见细菌引起的肺炎有明显区别，且 β- 内酰胺类抗生素和磺胺 类药物等治疗无效，因此临床上又将其与嗜肺军团菌、肺炎衣原体及立克次氏体等其他非典 型病原体引起的肺炎统称为“原发性非典型肺炎”。近年来发现非典型病原体尤其是肺炎支原 体已经是社区获得性肺炎的主要致病菌。 支原体是介于细菌和病毒之间的一类缺乏细胞壁、呈高度多型性、能通过滤菌器、可在 无生命培养基中生长繁殖的最小原核细胞型微生物。迄今分离到的支原体已达150 余种，已 确定与人类疾病关系最大的有3 种，肺炎支原体（mycoplasma pneumonia, MP）是其中的一 种。MP 在国内外都是儿童和成人呼吸道感染的重要病原体之一，主要导致肺炎，所有肺炎 的15-20%，约50%的儿童和青少年肺炎是由MP 引起的.因此MP 肺炎（MP pneumonia,MPP） 是常见病和多发病。但迄今为止，MPP 仍缺乏快速、可靠的诊断试验，因而临床确诊困难。 MPP 的诊断包含两个层面：临床诊断（经验性）和结合了实验室病原学检测的确定诊断。 一、MPP 临床诊断：根据流行病学、临床症状、体征、实验室辅助检查等特点经验性综 合判断而出。MPP 有着不同于一般感染性疾病的的特点：一般肺炎多发于冬季，MPP 一年四 季均可发病，但多发生于夏秋季节；临床症状大多只有发热和咳嗽；外周血白细胞总数大多 不高；疾病早期X 线检查即可出现肺炎，约10%-20%的病例会出现肺不张；因MP 无细胞壁， 临床常用的、作用于细胞壁的、安全性高的治疗肺炎的药物如β -内酰胺类的青霉素类、头 孢类抗生素对其无作用；因此易被误诊为病毒性肺炎。综合上述特点，可作出初步的经验性 临床诊断。 二、实验室病原学诊断：包括直接病原体检测和血清学检测。下面介绍几种常用或经 典的MP 实验室诊断方法。 （一）直接病原体检测：主要有MP 分离培养和聚合酶链反应（PCR）法检测MP-DNA。 检测用标本可取自可疑患者呼吸道的痰、咽拭子、鼻咽吸出物、支气管肺泡灌洗液、胸水等。 1、MP 分离培养与鉴定： MP 很挑剔，培养基的营养要求比一般细菌高，生长速度慢， 较一般细菌难培养；分离培养需要10-14 天，而通常需要2-5 周才能生长成肉眼可见的菌落。 通过生化反应和免疫学方法进行鉴定。还有其它影响因素，如MPP 无细胞壁，对环境的影响 更为敏感，易被灭活；标本采集后接种到培养基的过程也是培养可能失败的一个环节。由于 其费时、费力、阳性率低，实际临床已经弃用此方法，目前主要用于研究性项目。 2、PCR 法检测MP-DNA：PCR 是一种模拟体内DNA 复制的体外扩增法，以其灵敏性、特 异性高，检测所需时间短，能够直接从标本中检出病原体并可定量及分型，已广泛应用于各 种感染性疾病的诊断中，如SARS、禽流感、A/H1N1 流感的确诊都主要用此方法。常用于MP 检测的是双引物两次扩增反应的套（巢）氏PCR （nested PCR，nPCR）和基于荧光能量传递 技术的实时定量PCR （real-time quantitative PCR），其中实时定量PCR 可以检测到少于5 个基因拷贝的MP。美国 1996 年的一次MP 感染暴发的流行病学调查，对部分患病者的呼吸 道分泌物以PCR 检测MP-DNA 阳性率为57%，同样患者的MP 培养阳性率仅5%。 3、直接镜检：MP 没有细胞壁而没有固有型态而呈高度多型性，且革兰氏染色不易着色， 因此难于用光学显微镜观察。 （二）血清学检测：检测MPP 患者血清抗体有多种方法，传统、经典和常用的有4 种， 为冷凝集试验、补体结合试验、间接血凝试验、酶联免疫吸附试验。 1、冷凝集试验（CA）: MP 感染后患者血清中产生一种非特异性冷凝集素 （IgM 型）， 可能是MP 作用于红细胞Ⅰ型抗原，使其变性后产生的自身抗体。将患者的稀释血清与人 O 型红细胞混合，4℃过夜，观察红细胞凝集现象，放37℃后其凝集现象消失，故称为冷凝集 试验。Garrow 建立了一种快速方法：取0.2ml 全血，加0.2ml 3.8%枸橼酸纳混合，置于0-4℃ 冰箱中15-30 秒取出，倾斜试管观察凝集情况，如有粗大絮状颗粒是为阳性。仅有50%左右 的MPP 患者冷凝集试验阳性，一般在发病一