肺炎链球菌体内诱导基因的筛选及初步鉴定.pdfVIP

卷 期 ! ! 微 生 物 学 报 !（）： ! ’( ) !* 年 月 日 #$$ % ! !#$ %’()(*(+$ ,-$ ! +,-,./ #$$ !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 肺炎链球菌体内诱导基因的筛选及初步鉴定 孟江萍，尹一兵 ，张雪梅，黄远帅，蓝 锴 （重庆医科大学医学检验系 临床检验诊断学省部共建教育部重点实验室 重庆 !$$$* ） 摘 要：为筛选鉴定肺炎链球菌宿主体内诱导的基因，寻找潜在的抗生素作用靶点和疫苗候选者，应用体内表达技 术，以肺炎链球菌荚膜合成的关键基因!#$ 作为体内报告基因，利用其缺陷体不能合成荚膜多糖，从而不能在宿 主体内存活的特点，筛选鉴定肺炎链球菌体内诱导基因。首先，把肺炎链球菌基因组 的随机酶切片段（ BC+ #$$ ) $$9D）克隆到含有体内、体外双重报告基因（ ）的报告载体 的 位点，将获得的质粒库转化 !#$3 #% D4EF’3!#$ ’!# ! 肺炎链球菌!#$ 缺陷菌株，得到肺炎链球菌体内启动子诱捕文库，将此文库去感染G+HGI = 小鼠，经过两轮体内筛 选，在涂布有 的 血清平板上得到了 个白色菌落，对插入的随机片段进行测序及生物信息学分析，共 J3-62 0K+ * 证实 个不同的体内诱导基因片段， 个为单独的 ，个为含有多个 的操纵子结构，它们分别参与细菌 * % LMN ( LMN. 在宿主体内的定植与粘附、能量代谢、物质转运、转录调节、 复制与重组、细胞壁合成等，另外还包括功能不明 BC+ 的假想蛋白。其中部分LMN. 可能与细菌毒力相关，可以作为候选疫苗和药物的靶标。 关键词：肺炎链球菌；体内诱导基因；体内表达技术；荚膜多糖 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） M’(% O *! + $$$*3#$? #$$ $!3$’(3$ ［］ ! 肺炎链球菌（ ， ）是 ， ） 、笔 迹 标 识 诱 变 ()*+, )-%-%%./ , 0+.1-02+ ( , 0 1RDS1..7: /1=T:2-8 UE40 ［］ 上呼吸道感染和严重侵袭性感染（脓毒症、脑膜炎） （