温光诱导甜菜当年抽薹过程中过氧化物酶的研究.pdfVIP

2002年第 2期 中 国 甜 菜 糖 业 2o02No．2 2002年 6月 CHINA BEET ＆ sUGAR Jun ．2002 温光诱导甜菜 当年抽薹过程 中过氧化物酶 的研究 常 缨 ，戴建军 ，马凤鸣 (东北农业大学 ，黑龙江 哈尔滨 150030) 摘 要：通过温光条件诱导甜菜(BetaVulgari．sL．)当年抽薹的过程 中，诱导株 内部发生复杂的生理和生化 变化，在低温春化后过氧化物酶活性表现出较高水平，以后随着生育的进程而逐渐降低，与对照组比较差 异显著，并从过氧化物酶的同工酶酶谱、过氧化物酶的超微细胞化学定位的角度加 以证明。 关键词 ：甜菜；抽薹；过氧化物酶 ；同工酶 ；酶定位 中图分类号：S566．3；Q554．*6 文献标识码 ：A 文章编号：1002—0551(2o02)02—0003—03 0 前言 1．2 试验方法 1．2．1 过氧化物酶(POD)活性测定 参照刘祖琪 温光诱导甜菜当年抽薹的过程 ，实际上是春化 (1994)的方法 。酶液制备：取甜菜鲜叶片 2．0g，加 作用与光周期的协 同作用 。 目前仅知道茎生长点 入 5．0ml、62．5mmol／L(pH7．8)的磷酸缓冲液 (内含 是感受低温的中心部位，而感受光周期的诱导部位 适量 eve)，于冰浴上研磨，4℃离心 20min(12000 是叶片，这种协 同作用发生反应的部位在茎端，因 r／min)。上清液为酶液，置冰箱 内4℃保存备用 。 而甜菜植株在接受温光诱导后，会引起体 内许多代 在20ml刻度试管 中，分别加入 pH7．0磷酸缓冲液 谢途径和代谢方式 的改变 ，某些酶活性在低温作用 lml、0．1％邻 甲氧基苯酚 (愈创木酚)lml及酶液 下增加或减弱及某些特异蛋 白质的合成等等…。 lml，摇匀后 ，置于 30℃恒温水浴 中5min后 ，立即加 本项研究通过甜菜抽薹过程 中过氧化物酶活性等 入0．08％ H2O2溶液 lml并混匀 ，lmin后生成红棕 色的4一邻 甲氧基苯酚 (相 当于 1单位 的愈创木 的测定和分析，旨在探讨温光诱导甜菜当年抽薹过 程 中过氧化物酶的变化。 酚)。酶的活性用愈创木酚 · ·h表示。重复 3次，并设对照，用 lml蒸馏水代替 0．08％H202。 1．2．2 过氧化物 同工酶的分析 参 照汤章城 1 材料和方法 (1999)的方法。提取液的制备 ：取甜菜叶片 2g，加 入 pH5．0醋酸缓冲液 10ml，低温匀浆后，在 4℃下 1．1 试验材料 离心20min(8000r／min)，取上清液备用。 试验用甜菜品种为甜研 7号和甜研 8号。试 凝胶电泳 ：用 聚丙烯酰胺制成板状。丙烯酰 验土壤为黑土 ，基础肥力 中等 ，种肥施 N、P，05和 胺 ：N．N．一亚 甲基一双丙烯酰胺 =30：0．8(w／w)， K20，施用量每公顷分别为 90kg、90kg和 60kg。温 凝胶浓度为 7．0％，加入催化加速剂 N．N．N．N．一 光诱导材料先于对照组诱导 ，分 3个阶段进行 ：(1) 四甲基 乙二胺 0．o5％(V：V)和过硫酸铵 0．50