双抗体夹心酶联免疫检测法测定蓖麻毒素.pdfVIP

第3$ 卷 分析化学 （V96WH MOGWO9 ） 研究简报 第3 期 #%% 年3 月 SAF@N@ X7EF;= 7K GF;=YCD;= SA@:NCEY .3/ ( ..# 双抗体夹心酶联免疫检测法测定蓖麻毒素 ! ! # # # ! 杨运云 牟德海 童朝阳 穆唏惠 郝兰群 ! （中国广州分析测试中心广东省化学危害应急检测技术重点实验室，广州$!%%% ） # （解放军防化研究院第四研究所，北京 !%##%$ ） 摘 要 建立了双抗体夹心酶联免疫法检测蓖麻毒素的方法。优化了最佳蓖麻毒素多克隆抗体包被浓度和 包被方法、蓖麻毒素单克隆抗体工作浓度、酶标记二抗体工作浓度和显色时间等实验条件。方法的线性范围 在!’ # ( !% ’ % !)* + 之间，线性回归方程! , % %$# - % .# ，相关系数为% ’ //0# ，检出限为% ’ # !)* + 。将该方法 用于检测实际水样蓖麻毒素加标样品，回收率为/!’ 1 ( !%. ’ %1 ；检测实际土壤加标样品，回收率为 234 31 ( /2’ %1 ；检测奶粉加标样品，回收率为234 31 ( /. ’ %1 ；检测实际血液加标样品，回收率为$’ %1 ( 2#4 %1 。 关键词 蓖麻毒素，酶联免疫，双抗体夹心 ! 引 言 蓖麻毒素（EDF ）是一种核糖体失活蛋白，它由G 、8 两条肽链以二硫键共价相连，G 链具有使核糖 体失活的能力， ［!］ 8 链是一种半乳糖结合型蛋白 。蓖麻毒素具有很强的毒性作用，对成人的平均致死量 为!’ $ !) ，其作用机制是抑制蛋白质的合成，蓖麻毒素进入人体后，8 链结合到细胞表面，G 链则渗透到 细胞浆，使核糖体失活，从而抑制蛋白质合成。蓖麻种植广泛，蓖麻籽中蓖麻毒素含量高、毒性大、易于 提取，国外已有报道恐怖分子用蓖麻毒素作为恐怖袭击的手段［# ，3 ］。因此，建立蓖麻毒素的检测方法非 常重要。 ［. ( 0 ］ ［ ］ 目前检测蓖麻毒素的方法通常有免疫分析法 和生物质谱法 。生物质谱法需要使用昂贵的基质 辅助激光解吸电离质谱或电喷雾质谱，目前普及还较困难。而免疫分析法具有灵敏度高、便于检测生物样 ［0 ］ 品等优点。其中，酶联免疫（9+HIG ）技术由于操作简便、方法快速、仪器相对简单等优点应用日益广泛 。 蓖麻毒素单抗、多抗的亲和常数分别为# ’ /0 J !% 、. ’ !3 J !%2 +* :7= ，多克隆抗体对抗原具有更强 的富集能力，因此采用多抗包被更容易富集蓖麻毒素，然后用单抗进行识别可以发挥其灵敏度和特异 性。本文建立蓖麻毒素的多抗5毒素5单抗双夹心9+HIG 检测技术，将多抗对抗原的高富集能力与单抗 的高选择性结合起来，以提高检测方法的灵敏度和特异性。 # 实验部分 # ’ ! 仪器与试剂 87K)@ ##L 型冷冻离心机（德国M@E;@N 公司）；MC;DA O5#%% ! 型分光光度计（日本日 磁力搅拌机、 立公司）；02% 型酶标仪（美国87L;? 公司）。 蓖麻毒素、蓖麻毒素单抗和蓖麻毒素多抗（自制）；辣根酶标记山羊抗小鼠H)P（芭比尔生物技术发 展中