梨属DNA提纯方法的比较研究.pdfVIP

一 妻 一 酱k ， VoD1e．4c．N啪o4 梨属 DNA提纯方法的比较研究 ， ， I 1 ^l 马兵钢 ，赵宗胜0，冯建荣 ，高剑峰 ，蒋迪军 ，牛建新 ≥ c／l ／ (I石河子大学农学院 园艺园林工程系，石河子832003； 2石河子大学农学院动物科学系，石河子 832∞3； 3石河子大学生物科学系，石河子 832003) 提要：通过 比较试验．使用 5DS一氟仿 一异戊醇法，井添加 觚 及 v七．可简便、快速地 槊属成熟 叶 中提取大分子量能且很好地被酶切的 DNA,有效地去除了梨属植物组织 中富含的多酚类、单宁 、色素及 铺 关键词：梨属；库库尔尔勒勒香梨；I~NA；纯纯化化方方法法程踅：够。、L／f，{，【f…。rL《。f‘’ I 中圈分娄号 ：$661．2 文献标识码 ：A 文章编号 ：1007—7383(2000)040277—05 提取高质量的 是分子克隆的关键步骤，目前关于植物 fSqA 的提取有许多方法， 如 CTAB法L】．2J、SDS法L3_4J及高盐低 pH法等~5,63。通过这些方法 已成功地提纯 了许多动 植物的r A。刘萍还在农作物上进行 了I) 提取方法与植物种类的效应 比较研究 ]．结 果表 明，不同的植物应采取不同的提取力法，植物种类与提取方法互作效应的方差分析表 现极为显著。而对梨、葡萄 、棉花等单宁类物质、酚类及色素物质含量较高的物种来说。其 r A的提取、纯化较为困难，以一般 法提取的梨DNA质量不高，褐变严重，无法用于 扩增 l。S~yuriTeKⅡn∞ 等以 C~AB法提取梨 I A，然后过柱纯化作 RFIP用 [93，虽然能够 成功，但药品成本较高，操作复杂，对微量提取难于做到。本试验试 图对 的微量快速 提取法—— 6法做一些改进 ，加入BME和 vc作为抗氧化剂 ，使用氯仿 ：异戊醇作为抽 提剂，以得到一种简便迅速的梨屑 DNA 的提纯方法，可获得能完全酶切的高纯度 DNA。 1 材料与方法 1．1 材料 大香水梨 、库尔勒香梨分别取 自石河子大学农学院 园林系果树试验站和库 尔勒沙依 东园艺场。1999年 8月 10日取成熟 叶片，用 d O清洗除去表面污物，用滤纸吸干表面残 留水分 ，标记分装 ，置 一20℃冰箱冷冻保存备用。种子样品从贮藏果实 中刮 出，剥去种皮 ， 标记分装后 ，一20℃冷藏备用。 1．2 DNA的提取方法 12l CTAB1次裂解法 (方法 1) 参照文献 [9]。取 0．2g组织，加入 1Ⅱ讧 提取 buffer(700mmI／I，NaCI，100rr【 ／ lTris—HCIpl-[8．0，20rrrnol／lEDTApF[8．0，1．5％GTAB，1％m,IE)。按不同有机溶剂的抽提 方法分为4个处理，A：加入等体积的水饱和酚 ，缓慢颠倒混匀 l0min，12000r／min离心 1O 收穑 日期：1999-12．10 石河子大学学报 (自然科学版 ) 第 4卷 min，取上层水相 ，再依次用等体积的酚：氯仿 ：异戊醇(25：24：1)、氯仿 ：异戊醇 (24：1)各抽 提 1次 ；B：依次用等体积的酚：氯仿：异戊醇，氯仿 ：异戊醇各抽提 1次 ；C：用等体积的氯仿 ：异戊醇抽提 1次 ；D：对上清液不进行抽提 。 1．2．2 CTAB2次裂解法 (方法2) ． 取 0．2g组织 ，加 入 lmInNA提取 buffer(500rrr~l／LNaCI，100,m~t／ITris-HCIpH 8．0，20rrrml／IEDTApH8．0．1．0％sⅨ；)，再加入适量石英砂，冰沿研磨至糊状，移入 1．5