B6-Co小鼠角膜病的细菌学因素探讨.pdfVIP

华东地区第十届实验动物科学学术交流会 29 B6．Co小鼠角膜病的细菌学因素探讨 邵义祥·，殷小敏2，王春中1蒋荧梅-，管怀进： (南通大学1．实验动物中心，南通大学比较医学研究所；2．附属医院，南通226001) 【摘要】目的探讨B6一Co小鼠角膜浑浊形成的细菌学因素。方法以正常B6和B6一Co小鼠为研 究对象，从不同日龄组的小鼠眼部取角膜分泌物或角膜刮片，分另q接种到血平板和营养肉汤上， 恒温培养24h。挑取菌落或肉汤管内的悬浮液涂片，革兰氏氏染色，镜检，记录结果。将纯化培 养获得的细菌进行鉴定。结果正常B6小鼠与角膜浑浊小鼠存在角膜细菌学差异。结论B6．Co 小鼠角膜混浊与微生物感染有关。 【关键词】角膜病；细菌学；发病机制；B6．Co小鼠 角膜病是我国的主要致盲眼病之一，角膜疾病病因有多种，主要有炎症，外伤，先天性发育异常 和营养不良等，其中炎症引起的角膜病占首要地位…。 随着人们对角膜病认识的逐步深入及角膜病在眼科疾病防治中的重要地位，对角膜病病因的深入研究 成为了现在眼科研究的热点之一。细菌是导致化脓性角膜炎最常见的病因【2】，其致病种类众多。近年来， 研究者们也对角膜放线菌病例【，】，大泡性角膜病病因【。】，角膜病模型的建立等多方面进行了深入的研究。 B6．Co小鼠角膜浑浊的微生物因素进行了初步探讨。 1材料和方法 1．1实验动物 饲料，自由采食和饮水，室内温度控制在(23±2)℃，湿度控制在(55±5)％。 1．2实验仪器 Olymus ’ ATB细菌鉴定系 (上海申安医疗器械厂)；FXY．DHS型隔水式恒温培养箱(江苏海门市恒昌仪器厂)；SOP-416 统及配套设备(法国生物．梅里埃集团)；LSl07哥伦比亚血琼脂平板(广州市迪景微生物科技有限公司)。 1．3实验试剂 贝索生物技术有限公司)。 1．4实验方法 1．4．1 取营养肉汤细菌干粉培养基22 000 营养肉汤的配制 g，加蒸馏水l ml，加热溶解后，分装试管， 经121℃15min灭菌备用。 1．4．2结膜囊和病灶组织的病原体的取材选取角膜炎症急性期的B6．Co小鼠进行角膜刮片，取材过程中 若B6一Co小鼠双眼角膜病变则任取一只眼；若只有一侧角膜病变则取病变侧，取材时间点和数量见表l。 首先在超净工作台内以75％酒精消毒小鼠上下眼睑、睑缘及周围组织2_遍，无菌镊子将上下睑分 开(若小鼠眼睑任未分离则以无菌镊撕开眼睑)，充分暴露结膜囊，将接种环放于上下穹窿部内轻轻摆动刮 取分泌物，避免接触睫毛或睑缘皮肤，然后将标本分别放入肉汤增菌培养基和血平板上增菌。 30 华东地区第十届实验动物科学学术交流会 表1B6．Co和正常小鼠取材数量和时间 动物 一1～2 5 lO 尘15垦里2竺0 25 30．60 否qgt- 1．4．3细菌培养将已接种了标本血平板和肉汤增菌培养基培养基，置于35℃孵箱内，24和48h后观察 细菌生长情况。 1．4．4培养结果判断若48h无细菌生长者为阴性。试管和血平板任一有细菌生长者即为阳性。若试管 内有细菌生长而血平板无细菌生长者，则将试管内菌落接种于血平板上进行培养和观察。如出现菌落生 长，则进行分离培养鉴定。 1．4．5单细胞形态的观察将菌体在血平板上，35℃恒温培养18以4h后，进行革兰氏氏染色，光学显 微镜下观察细胞形态大小，排列方式等。 1．4．6革兰氏氏染色反应经结晶紫染色1mill一碘液染色1 min后，在 min一95％酒精30s一复红复染1 油镜下观察各菌的革兰氏氏染色反应。 1．4．7 ATB菌种自动鉴定在血平板上。3