外湿对大鼠内脏组织水通道蛋白的影响.pdfVIP

外湿对大鼠内脏组织水通道蛋白的影响1 张六通，陈刚，章敏 湖北中医学院基础医学部，武汉（430065 ） E-mail：zhang@ 摘 要：采用自动控制的人工气候箱作为大鼠造模笼，构建准确、量化、规范、可重复性好 的外湿证动物模型，用PCR 方法对大鼠内脏组织水通道蛋白进行定量分析，实验结果表明， 模型大鼠表现出湿邪致病的临床症状，同时调节人体水液代谢平衡最相关的因素水通道蛋白 mRNA 的表达由于外湿因素的影响，都存在不同程度的显著下降，从而致使体内水液的通 透性受到影响，其代谢受阻，导致体内水分过多而成湿。 关键词：外湿；大鼠；水通道蛋白 外感湿病是中医临床的一类常见病、多发病，元朱丹溪云：“六气之中，湿热为病， （） 十之八九” 。李氏 1 对石家庄市常见湿阻病进行的流行病学调查表明，人群易病率为10.55%。 气候较为干燥的华北地区尚且如此，全国其他气候湿润的地区尚且如此，全国其他气候湿润 的地区湿证的发生率及病程长短可想而知。对其开展实验研究，很有必要，但以往科研工作 者对湿进行研究时，由于科研技术条件的限制，无法对体内水液进行定量、全面的观察，所 选用的指标虽能说明湿对机体造成了影响，但对进入机体内的“湿”发生了哪些变化却无法描 述，这无疑极大的限制了外湿作用机制的阐明。水通道蛋白在机体分布广泛，大多选择性地 分布在那些与体液吸收与分泌有关的上皮细胞及可能协同跨细胞转运的内皮细胞中，维持着 （） 细胞内外水的平衡功能 2 。因而水通道蛋白的表达也能在很大程度上反映体内水液的变化 情况。笔者采用PCR 方法对大鼠体内与水液密切相关的指标水通道蛋白进行了定量分析， 现汇报如下： 1. 造模箱的选择 造模箱采用重庆市永生实验仪器厂生产的“SHH-250GS 人工气候箱”，该气候箱是具有 光照、加湿功能的高精度冷热恒温设备，为用户提供一个理想的人工气候实验环境。气候箱 采用专用温湿度电脑控制仪测控温湿度并设有最高温限温装置。箱内温度自动控制，箱内湿 度低于要求湿度时即可进行加湿、恒湿自动控制，光照采用液晶定时器按工作需要进行程序 控制，箱内气流循环采用进口轴流风机强迫对流，使箱内温度均匀。其工作原理是这样的： 气候箱由位于箱内的干球温度传感器感受到的实际温度转换成电信号，经放大器放大控制加 热器工作。其中仪表是根据测量值与设定值的差值来起作用；湿球温度传感器控制加湿器的 原理与干球控制方法相同，制冷机根据环境温度、湿度实际需要由控制面板上开关直接控制 开停，或由仪表设置成自动开停。光照控制可根据不同要求分别使用手动和自动控制。自动 控制采用时间继电器；手动控制可通过控制面板上开关直接控制。 因而该气候箱完全能够满足构建外湿证动物模型时所需要的一切客观条件。 2. 造模动物的选择 健康Wistar 雄性大鼠，体重200g 左右，购自湖北省预防医学科学院。 1 本课题得到“高等学校博士学科点专项科研基金资助课题”资助（编号：20040507005 ）。 - 1 - 3. 造模时程的选择 将受试动物放入气候箱饲养，分 7 天、10 天、20 天三种时程进行预实验，结果显示 20 天后大鼠的舌苔粘腻程度、大便、体重、饮食、精神等的变化更符合临床实际，因而确 定20 天为最佳造模时程。 4. 造模方法 将受试动物放入气候箱饲养，湿度、温度自动控制，相对湿度（RH ）=90% 以上，温 度（T ）=21±20C 。造模20 天。 5. 模型定性分析 造模20 天后，造模动物普遍出现嗜卧懒动、不欲饮食、消瘦、便溏、泄泻、苔腻(历 代医家认为，各类湿证中，苔腻为症状序列的第一位)等与临床所见近似的症状。这说明模 型在临床症状上已达到外湿造模的要求。 6. 外湿对大鼠组织水通道蛋白的影响： 6.1 大鼠肺水通道蛋白AQP1mRNA 表达