小细胞肺癌抗独特型单链抗体的表达及活性研究.pdfVIP

维普资讯 肿瘤 2006年 6月第 26卷第6期 TumorVo1．26，No．6，Jun．2006 ·529 · BasicResearch ·基础研究 小细胞肺癌抗独特型单链抗体 的表达及活性研究 张定昌 ，赵新泰。 (1．上海市第八人民医院肿瘤科 ，上海 200235；2．上海市肿瘤研究所细胞与分子免疫学研究室，上海 200032) [摘要] 目的 ：在大肠杆菌中高效表达小细胞肺癌 (SCIC)抗独特型抗体 3F6单链抗体 (ScFv)，并获得具有生物学活性的 ScFv。方 法 ：从 SC1C抗独特型抗体 3F6小 鼠杂交瘤细胞 中提取总RNA，反转录为 cDNA。利用小 鼠抗体骨架 区共用 引物 ， PCR扩增单抗重链可变区(VH)和轻链可变区(vb)。通过人工设计 的柔性连接肽 (Gly4Ser)3连接构建 3F6ScFv。再将其重 组到原核表达载体 pQE31中，构建 3F6ScFv表达载体。转化大肠杆菌 M15，IPTG诱导表达 ，用 Ni—NTA树脂对表达产物进 行变性纯化 。通过凝胶(SephacrylS-200)柱上在位复性后 ，用竞争 ELISA检测复性的3F6ScFv活性 。结果 ：获得 了SCLC 抗独特型抗体3F6的VH和 VL基 因，构建 了3F6ScFv表达质粒。在大肠杆菌中高效表达 3F6ScFv，表达 蛋 白的相对分子质 量为32×10。，以包涵体形式存在 。纯化后获得较纯的 3F6ScFv蛋 白，经复性后可竞争 2F7抗体与SCICNIH—H128细胞结 合 。结论 ：成功构建 、表达 、纯化和复性 了SCLC抗独特型抗体 3F6ScFv，获得有活性的3F6ScFv，为 SCLC抗独特型抗体 的 进 一步研 究奠定 了基础。 [关键词] 肺肿瘤；癌，小细胞；抗体，抗独特型；基因表达；免疫活性 [中图分类号] R734．2 [文献标识码] A [文章编号]2006)06—0529—04 Expression andactivitymeasurementsofsinglechainFvofanti—idiotypicantibody3F6 againstsmallcelllungcancer ZHANG Ding—Chang ，ZHAO Xin—Tai! (1．DepartmentofTumor，EighthPeoplesHospital，Shanghai200235，China； 2．IaboratoryforCellularandM olecularImmunology。ShanghaiCancerInstitute。Shanghai200032．China) [ABSTRACT] 0bjective：ToexpresssinglechainFv(ScFv)ofantiidiotypicmonoclonalantibody(mAb)3F6againstsmallcell lungcancer(SCIC)inEcolitogetfunctionalproduct．M ethods：ThetotalRNA wasextractedusingTrizolfrom thehybridoma cellssecretinganti—idiotypicmAb3F6andreverselytranscribedtocDNA．Thevariableregionsofheavychain (VH)andlight chain (VI)ofanti—idiotypicmAb3F6wereamplifiedbypolymerasechainreaction (PCR)usinguniversalprimersattheframe workregionofmouseantibody。TheScFvofmAb3F6wasconstructedbyconnectingVH andVIbyalinkerpeptide(Gly4Ser) 3usinganassemblyPCRandsubclonedintotheexpressionvectorpQE31．ThepQE一3F6ScFvwastransformedint