自由基检测方法.pdf

动物医学进展 ，2007，28(7)：107—110 ProgressinVeterinaryM edicine 自由基检测方法 赵 宝洪 ，高 洪 ¨，屈长林 ，陈 超 (1．云南农业大学动物科学技术学院，云南 昆明 650201；2．海关总署缉私局瑞丽缉毒犬基地 ，云南瑞丽 678600) 摘 要 ：自由基是含有未成对电子的原子 、分子或原子 团，它是线粒体在 电子传递的过程 中产生的，正常 情况下，机体的 自由基清除系统可使 自由基的产生与消除保持在极低的动态平衡水平上t对机体是有利的t 但 当体内蓄积过量 自由基时，它能损伤细胞 ，导致动物组织或细胞的氧化 ，损害细胞膜上的脂类和蛋 白质等， 从而使细胞膜黏度增加 ，流动性下降，抗氧化酶丧失活性 ，造成膜 内外离子交换紊乱等，致使细胞 内钙离子超 载 ，黄嘌呤氧化酶活性升高，又进一步加速 自由基 的产生。为提高 自由基对动物机体损伤的诊断效率，近年 来 自由基检测方法在病理学、生物学中发展迅速 ，并得到 了广泛应用。 关键词 ：自由基 ；检测方法；概述 中图分类号：$852．3 文献标识码 ：B 文章编号：1007—5038(2007)07—0107—04 自由基 (freeradicals，FRs)化学反应性极强 ，极 GSH-Px催化降解为水和氧。 不稳定 ，半衰期短 ，其化学反应性 的特点是连锁反 1．1 超氧化物歧化酶的测定 应 ，一经启动即可连续发生。从生物学角度讲 ，通常 SOD属于金属酶 ，分 CuZn—SOD、Mn—SOD、Fe- 所说 的FRs主要是指活性氧 (activeoxygen)，即氧 SOD3种 。由于 SOD的底物超氧 阴离子 自由基寿 的某些代谢产物和一些反应的含氧产物。由于 FRs 命极短，目前除了应用脉冲射解技术或快速冰冻结 具有活泼的化学反应特性 ，因而在生物体 内具有重 合电子 自旋共振 (electronspinresonance，ESR)波 要的生理及病理功能，具有重要 的生物学意义[1。]。 谱直接获得 SOD与超氧阴离子 自由基反应的动力 自1900年，GombergM 首次证实三苯 甲基 自由基 学信息外，一般都采用间接 的活力测定法来测定 以来，自由基参与生命过程 中许多重要的生化反应 SOD。下面介绍几种重要的测定方法 。 逐步为人们所认识 ，特别是随着现代检测分析技术 1．L1 邻苯三酚 自氧化法 国外多使用经典 的邻 的 日新月异 ，自由基在生物和病理学领域的作用研 苯三酚 自氧化法 (简称 Marklund法)，Marklund法 究迅速发展 。而寻求简便、快速、准确、高效的自由 是采用 420nm处光吸收测定 。酶活力定义为 ：在一 基检测方法成为研究 自由基生物学作用的关键[5]。 定条件下 1mL的反应液 中，每分钟控制邻苯三酚 与医学密切相关 的 自由基是氧 自由基 (oxygen 在 420nm波长的 自氧化速率达 5O 的酶量定为 1 freeradical，OFR)，包括超氧阴离子和羟 自由基 ，大 个活力单位。顾孔书等对邻笨三酚 自氧化法的测定 量研究结果表明自由基与许多疾病的发生有着密切 结果影响因素进行 了探讨 ，结果邻苯三酚 自氧化法 的联系，特别是与生物膜损伤的关系更是 目前研究 受到溶液的酸碱性、温度 、存放时间及邻苯三酚的浓 的热点[6]。自由基 已日益受到人们 的重视 ，现将 自 度的影响。 由基的检测方法介绍如下。 1．1．2 亚硝酸盐形成法 通过黄嘌呤及黄嘌呤氧 1 自由基相关酶的测定 化酶反应系统产生超氧 阴离子 自由基 ，后者氧化羟 机体内清除 自由基的酶系统主要有超氧化物歧 胺形成亚硝酸盐，在显色剂的作用下呈现紫红色，用 化酶 (Superoxidedimutase，SOD)、过氧化氢酶 (cat- 可见光分光光度计测其吸光度 。当被测样 品中含 alase，CAT)