苏云金芽孢杆菌酪氨酸酶基因的克隆表达及应用初探.pdfVIP

卷 期 !! 微 生 物 学 报 ’( )!! 0’ ) 年 月 #$$! %# !#$ %’()(*(+$ ,-$ *+,+-.+/ #$$! !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 苏云金芽孢杆菌酪氨酸酶基因的克隆表达及应用初探 何 伟 阮丽芳 孙 明 李茜茜 喻子牛 （华中农业大学 农业微生物学国家重点实验室 武汉 !5$$4$ ） 摘 要：酪氨酸酶基因编码的酪氨酸酶是生物体合成黑色素的关键酶。采用比较酪氨酸酶的同源保守结构域氨基 酸序列的方法设计引物，从苏云金芽胞杆菌（ ） 中通过 扩增得到了包含酪氨酸酶基因 !#$%%’ ()*$+,$-+’$’ !*%% FGH 的 片段。将该片段亚克隆到载体 上并转入大肠杆菌 ，所得到的转化子在添加了 酪氨酸的 *0I JK:L34=M *N6! O3 OP 培养基中能合成可溶性的黑色素。测定该菌株黑色素的产量和在紫外光照射后的菌体活力，结果表明该基因产生 的黑色素能在一定程度上保护菌体免受紫外辐射。 关键词：酪氨酸酶基因，黑色素，苏云金芽孢杆菌，克隆 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： （ ） Q42 I $$$%3#$C #$$! $3$2#!3$5 酪氨酸酶是生物体中合成黑色素的关键酶，它催化O3 步研究发现苏云金芽孢杆菌高温诱导所产黑色素也是经酪 酪氨酸形成 多巴及多巴醌，随后多巴醌经一系列非酶促 氨酸酶氧化酪氨酸途径产生的，该黑色素能大大提高苏云金 O3 反应形成黑色素。黑色素是一类广泛分布于生物界的一种 芽孢杆菌对T 的抗性。本文在此研究的基础上，克隆了苏 无定型物质，它在生物体内表现多种生物学功能：例如抗氧 云金芽孢杆菌酪氨酸酶基因并在大肠杆菌中获得表达，验证 ［］ ［］ 化% # 了其功能。同时对黑色素的产生以及对生物活性的保持也 、对生物大分子具有光保护活性 等。目前报道能产生 黑色素的细菌包括 ， ， ， 进行了研究。为苏云金芽孢杆菌功能基因组研究及构建产 .-*/0/+’ .1/(/2#(-* 34#/2#(-*$0 3$5 #*/#/##’ ， ， ， ， 和 。 黑色素杀虫基因工程菌提供了有益的参考。 !#$%%’ 6(*-7(/04#-’ 8$2*$/ 9)$1/2$0 6)-:+-%% 苏云金芽孢杆菌（