木聚糖酶活性测定方法的研究_冯培勇.pdfVIP

研究简报 生命科学仪器 2009第7卷/4月刊 木聚糖酶活性测定方法的研究 冯培勇，左言美，袁腾飞，黄雪菊，靳立斌，李宁宁 （鲁东大学生命科学学院，山东 烟台 264025） 摘要 探讨了木聚糖酶活性测定中的几个关键因素对酶活性的影响。结果表明，木聚糖酶活性测定的最适条件是： 测定温度55℃，pH5.5，底物浓度1%，酶促反应时间10min，稀释度40。 关键词 木聚糖酶；测定方法； DNS法 木聚糖是植物半纤维素的主要成分，是自然界 称取预先于105℃干燥至恒重的木糖1.0000 g， 中广泛存在、含量仅次于纤维素的可再生多糖资源。 用蒸馏水溶解后定容至100 ml，即为1%浓度的木 木聚糖酶(xylanase ,EC.3.2.1.8)以内切方式降解木聚糖主 糖标准溶液。 链架的β-1,4-木糖苷键，其水解产物主要是木二糖 1.2.4　DNS试剂[6] 和木寡糖，以及少量的木糖和阿拉伯糖。木聚糖酶应 DNS试剂的配制好后过滤，贮存于棕色瓶中，放 用于畜牧业，可改善饲养动物的消化道功能、增强饲 置1周后使用。 养动物的免疫力、提高饲料利用率和生产性能、减少 1.　标准曲线制作3 [1-3] 用移液枪精确吸取1%木糖标准溶液1.0，2.0， 粪便对环境的污染 。应用于食品工业，可提高食 [4-5] 3.0，4.0，5.0，6.0 ml于50 ml容量瓶中，用蒸馏 品品质和加工效率，还具保健功能 。 研究关键因素对木聚糖酶活性测定的影响有利于 水定容至刻度，稀释成浓度分别为200，400，600，800， 统一标准，进一步规范木聚糖酶活性的测定方法。 1000，1200μg/ml的木糖标准液。各取不同浓度的稀 释标准液0.5 ml于三支平行试管中，加入pH 5.0磷酸 1　材料与方法 氢二钠-柠檬酸缓冲液1.5 ml， DNS试剂3.0 ml，沸水 1.1　样品 浴5 min，取出后用移液枪加入蒸馏水10 ml，摇匀。以 用本实验室筛选的木霉菌，经液体发酵，离心 蒸馏水0.5 ml作为对照。冷却后，在波长550 nm处用 取上清液制得。 分光光度计分别测定其吸光度A。以A为纵坐标，木 1.2　溶液及其配制 糖浓度为横坐标，绘制标准曲线。 1.2.1　缓冲液 1.4　酶活性测定 甲液：称取磷酸氢二钠(NaHPO·12HO)71.62 g， 样品经过适当稀释，精确吸取酶液0.5 ml(每个样品 2 4 2 用蒸馏水溶解，并定容至1000 ml；乙液：称取柠檬酸 3支平行试管)，加底物1.5 ml（样品与底物都提前40℃ (CHO. 水浴预热５min）。混合后于40℃水浴精确反应10 min， HO) 21.01 g，用蒸馏水溶解，并定容至1000 6 8 7 2 ml。pH 5.0缓冲液：取甲液515 ml，加乙液485 ml，混 迅速加入DNS液3.0 ml终止反应，然后在沸水浴5 min， 合均匀，用pH计校正。 取出后加入蒸馏水10 ml，摇匀。空白对照，在待测稀 1.2.2　底物 释酶液0.5 ml中先