一种简便快速的大肠杆菌质粒转化方法ASimpleandRapidMethodfortheTransformationofEs.pdfVIP

遗传HEREDITAS(Beijing)21(4):48一511999 技 洲阵 与 方 法 · 一种简便、快速的大肠杆菌质粒转化方法一‘ 郭培 k1，陈向东 谢志雄，沈 萍 武（汉大学生命科学学院．湖北武汉430072) 摘 要：将受体菌与质粒DNA混匀直接在Ca2+离子选择平板上进行转化和筛选，其转化过程仅需2 而n左右，并能得到105以上的转化效率，可满足一般克隆工作的需要。 关键词：转化 大肠杆菌；Ca-十选择平板 中图分类号：Q933,Q93.039 文献标识码：B 文章编号：0253-9772(1999)04-0048-51 ASimpleandRapidMethodfortheTransformation ofEscherichiacolibyPlasmids GUOPei-yi,CHENXiang-dong,XIEZhi-xiong,SHENPing (CollegeofLifeSciences,WuhanUniversity,Wuhan430072,China) Abstract:AftermixingtherecipientcellsandplasmidsDNA,directlyspreadthemixtureonselectiveme- diacontainingCat+.Thewholeprocessoftransformationjustneeds2minorso,andcouldacquirethe transformationefficiencyofmorethan105,whichisenoughtocommongenecloning Keywords:Transformation;Escherichiacoli;Cat+selectiveplate 转化是分子克隆中将外源DNA导人受体细胞的关键技术，自197。年Mande！和Higa发现用CaCl,处理的 细菌细胞可被元噬菌体DNA转染后cu，接着在1972年和 1973年Cohen等人用同样的方法首次成功地将R 因子和重组质粒DNA导人大肠杆菌细胞 E（scherichiacoli)c2.3)，而成为基因工程的创始人 此后在转化技术 上虽有过不少的改进，但都旨在如何提高转化效率上4〔-6)，自70年代中期以来，使转化效率作为分子克隆中 限制因素的时代已一去不复返了”7〔8〕 但就方法本身而言一直没有大的变化，而是作为一种常规转化技术一直 沿用至今 8-〔10)。该转化技术主要由三部分组成8)〔:(1)用CaCl2诱导受体细胞使其成为”感受态’，(2) DNA转化受体细胞；(3)涂布平板筛选转化重组子。一般至少需要 2h完成。我们这里介绍一种十分简便迅速 的质粒平板转化方法，该方法删除了常规方法中十分费时、繁杂的 （1)和 2（)二部分的操作，而是直接在Ccaa-+ 选择平板上一次完成，整个过程仅需2min左右，转化效率与常规方法相当，足以满足一般克隆工作的需要 1 材 料 和 方 法 1.1 菌株 大肠杆菌 （E.coli)TG1、HB10I.DH5a，本实验室保存。 1.2 质粒 is收稿日期：1998-11-03；修订日期：1999-02-01 基金项目：国家自然科学基金 3（9670397）资助项目。 作者简介：郭培x(1977,1一）女，湖北武汉人，1995级本科生，专业：微生物遗传学。 4期 郭培魏等：一种简便、快速的大肠杆菌质粒转化方法 49 pBR322购自华美生物工程公司；重组质粒pJH由本实验室构建 ”〔〕；枯草杆菌一大肠杆菌穿梭重组质粒 pBE2,中科院微生物学研究所郭兴华先生馈赠c12)。 1.3 试剂、培养基及主要缓冲液 Bacto-Tryptone及 Yeastextract为英国Oxiod公司生产；氨节青霉素由华北制药厂生产 ·RNase. ProteaseK,BamHLDNAMarker等均购自华美生物工程公司；其它化学试剂均为分析纯产品。 LB培养基及用于质粒提取、检测的各种缓冲溶液均参照Sambrook等的方法配制8)〔，而用于平板转化的 Cat十选择平板是在LB固体培养基加