海蓬子盐胁迫初期抑制消减杂交cDNA文库的构建.pdfVIP

( ) ( ) 113 江苏农业学报 J iangsu J. of A g r. S ci. , 2006, 22 2 : 113 ～116 海蓬子盐胁迫初期抑制消减杂交 cD NA 文库的构建 1, 2 1 2 3 3 1 2 张大栋 , 　马鸿翔 , 　吉晓佳 , 　周春霖 , 　王茂文 , 　汤日圣 , 　杨永华 ( 1. 江苏省农业科学院农业遗传生理研究所暨江苏省农业生物学重点实验室 ,江苏 南京 2 100 14; 2. 南京大学医药生物技术 国家重点实验室 ,江苏 南京 2 10093; 3. 江苏沿海地区农业科学研究所 ,江苏 盐城 224002) 　　摘要 : 　为提高缩叶肉质盐生植物海蓬子总 RNA 和 mRNA 的质量 ,将改良 CTAB 法与 Tripure试剂盒方法相结 合 , 从 300 m g海蓬子发芽后 20 d 的幼苗中成功分离和纯化了高纯度的总 RNA 和 mRNA 。并以无 N aCl处理为 D river, 以 200 mmol/L N aCl处理 24 h、48 h、72 h的幼苗为 Te ster,通过 cDNA 双链的合成及两次 PCR 扩增 ,富集到 两组处理中差异表达的大小在 200 ～1 300 bp的 cDNA 序列 , p GEM T 的连接和蓝 白斑筛选表明杂交文库滴度和重 7 组率分别达到 2. 6 ×10 和 96% ,共收集阳性克隆 12 000个 , 形成了抑制消减杂交的质粒 cDNA 文库 。随机挑取酶 切质粒的电泳分析表明 ,载体中均有插入片段 。两种 RNA 提取方法的结合有效提高了多汁多色素海蓬子 RNA 的 质量 ,高效抑制消减杂交文库的建立为进一步分析基因的差异表达及分离抗盐基因奠定了基础 。 关键词 : 　盐生植物海蓬子 ; 抑制消减抑制杂交 ; cDNA 文库 ; RNA 分离 中图分类号 : 　Q785　　　文献标识码 : 　A 　　　文章编号 : (2006) Con struction of cD NA L ibrary of Sa licorn ia b igelovii Torr. dur ing Early Stage of Sa lt Stress Ba sed on Suppression Subtractive Hybr id iza tion 1, 2 1 2 3 3 ZHAN GD a dong , 　MA Hong xiang , 　J IX iao j ia , 　 ZHOU Chun lin , 　WAN GM ao wen , 　 TAN G 1 2 R isheng , 　YAN G Yonghua ( 1Institu te of A g robiolog ica l Genetics and P hy siology, J iangsu A cadem y of A g ricu ltu ra l S ciences, N anj ing 2 100 14, Ch ina; 2 S ta te Key L abora tory of P ha