基于细胞组装技术的细胞冻存技术研究.pdfVIP

●昆第四届全国生物复合材料学术研讨会论文集 407 基于细胞组装技术的细胞冻存技术研究 许慧容王小红木颜永年张人佶 (清化大学机械工程系，先进成形教育部重点实验室，北京，100084) 摘要：目前细胞三维直接受控组装应用在工程化组织的构建方面的研究较多，而对相应组织工程产品的低温保存研究甚少。 本文研究不同浓度的冻存保护剂二甲基亚枫对由细胞直接受控组装技术构建的工程化组织的低温储藏效果的影响。本文先在 40C下将二甲基亚枫与明胶、海藻酸纳、脂肪干细胞直接混合并按预定结构成形，再将结构体移至40C冰箱20分钟，再移 二甲基亚枫(v／v)的结构体复苏后细胞存活率分别为71％、27％和3％。而不含二甲基亚枫的结构体存活率仅为29％。倒置相 差显微镜观察，结合HE染色、MTT检测结果表明含5％二甲基亚枫的结构体复苏后细胞增殖明显。基于细胞组装的细胞冻 存技术在复杂器官制造方面具有重要的作用。 关键词：细胞直接受控组装快速成型组织工程低温保存 0． 刖舌： 细胞悬液。工程化组织细胞外基质成分和密度影响 冻存保护剂的渗透，而且工程化组织通常结构较为 支架与种子细胞的复合是组织工程研究的关 脆弱【131。对低温保存的条件要求更高。Irirnia等【141 键步骤和方法。目前主要的复合技术有两种，一种 利用微构形技术．证明细胞间的缝隙连接传递细胞 是将细胞悬液滴加到支架内或将支架材料直接浸 内冰晶形成，从而说明单细胞和有相互作用的多细 入细胞悬液中，另一种是细胞与基质材料共混、基 胞结构在低温下有不同的行为方式，因此不能简单 于离散／堆积快速成形原理的细胞直接受控组装技 的把单细胞低温生物学的结论直接照搬到组织和 术。清华大学生物制造工程中心将细胞与生物相容 工程化组织上来。Kang等115】分析比较了单层成纤 性很好的水凝胶材料(37。c至0*C之间1均匀混合， 维细胞和三维支架内成纤维细胞对低温的反应。发 通过控制溶胶／凝胶相转变，实现在成形支架的同时 现在三维胶原支架内培养的细胞经过低温环境复 复合细胞【1】。第一种方法简单，但难以空间定位不 苏后其应激蛋白如热休克蛋白27、热休克蛋白70、 同功能的细胞。第二种方法可以被应用在按着解剖 热休克蛋白90等的表达比单层细胞和悬浮细胞更 学的准确位置定点排布细胞以期获得生物学功能 强烈，同时发现对于纤维蛋白的合成和多种生长因 的复杂问题中口】。目前，该中心对多种细胞基质材 子的生成也更多。提示低温保存可能为工程化组织 料受控组装、细胞基质材料组装后三维结构体长期 带来额外的好处，经过冻存的产品更能适应病理环 稳定性及向特定功能组织转变的研究已有～些可 境，更能促进伤口愈合和组织修复。 喜的成果【3一，但对于相应的组织工程化产品的低温 本论文将冻存保护剂二甲基亚枫(DMSO)直 保存研究较少。 接与明胶／海藻酸纳朋旨肪干细胞相混