一种纳豆芽孢杆菌的分子鉴定及纳豆激酶基因克隆.pdfVIP

第35 卷第2 期 2013 年3 月 Vol.35 No.2 Journal of Tangshan Teachers College Mar. 2013 生物科学与技术研究 一种纳豆芽孢杆菌的分子鉴定及纳豆激酶基因克隆 1,2 2 1 李建强 ，石洪凌 ，肖冬光 （1. 天津科技大学 生物工程学院，天津 300000 ；2. 唐山师范学院 生命科学系，河北 唐山 063000 ） 摘 要： 以实验室保藏的一株具有溶解血栓能力的芽孢杆菌（LJQ-NK ）为出发菌株，通过形态学分析和 16SrRNA 比对，对菌株进行鉴定，更进一步利用聚合酶链式反应（PCR ）克隆纳豆激酶DNA 片段⑤16SrRNA 比对。结果表明LJQ-NK 与已报道的纳豆激酶16SrRNA 序列有99.9% 以上的同源性，初步认定为一株纳豆芽孢 杆菌。克隆获得 1 120 bp 的DNA 片段，应用DNAMAN 软件分析，与已报道的纳豆激酶编码基因（G） 存在两个碱基的差异，编码纳豆激酶开放阅读框区域序列完全相同。 关键词：纳豆芽孢杆菌；纳豆激酶；16S；rRNA 比对 Q785 A 1009-9115(2013)02-0037-04 中图分类号： 文献标识码： 文章编号： DOI ：10.3969/j.issn.1009-9115.2013.02.013 Molecular Indentification of Bacillus Subtilis Natto and Clone Gene of Nattokinase 1, 2 2 1 LI Jian-qiang , SHI Hong-ling , XIAO Dong-guang (1. College of Biotechnology, Tianjin University of Science and Technology, Tianjin 300000, China; 2. Department of Life Science, Tangshan Teachers College, Tangshan 063000, China) Abstract: LJQ-NK, a strain with ability of fibrinolysis was identified by molecular biology method. Sequence analysis shows that the homology of 16S rRNA between LJQ-NK and Bacillus subtilis natto was exceeded 99. 9%. The putative nattokinase cDNA was cloned from LJQ-NK using RT-PCR and a 1 126 bp cDNA clone was obtained. Result of BLAST-X sequence homology search show that two bases of putative nattokinase cDNA clone were differed from nattokinase and the ORF sequence of nattokinase between LJQ-NK and Bacillus subtilis n