营养缺乏自噬因子1对人脑胶质瘤U251细胞增殖侵袭能力的影响.pdfVIP

82 新医学2015年2月第46卷第2期 基础研究论著 营养缺乏 自噬因子 1对人脑胶质瘤 U251 细胞增殖侵袭能力的影响 江汉清 罗仑 梁朝峰 【摘要】 目的 探讨营养缺乏自噬因子1对人脑胶质瘤U251细胞增殖侵袭能力的影响。方法 复苏培养人脑胶质瘤U251细胞，建立转染小干扰 RNA (siRNA)的NAF1组 (si—NAF1组)、阴性对 照组 (si．NC组)、未转染 siRNA对照组 (control组)，采用CCK一8实验检测细胞增殖能力、平板克隆 形成实验检测细胞克隆形成能力、细胞划痕实验检测各组细胞迁移能力、Transwe11法观察各组细胞侵 袭能力变化 。结果 与 control组比较 ，NAF1一siRNA干预 U251细胞后 ，si—NAF1组 NAF1的mRNA和 蛋白表达水平均明显降低 (P均0．05)，其增殖细胞核抗原 (PCNA)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9) 蛋白表达水平降低，细胞增殖能力下降，克隆形成能力明显减弱，迁移能力明显降低，穿过Transwell 膜的细胞数量明显减少 (P均0．05)。si—NC组与control组各项结果比较差异无统计学意义 (P 0．05)。结论 转染siRNA后NAF1表达下降，进而下调PCNA水平，抑制人脑胶质瘤U251细胞的增 殖能力；同时MMP-9蛋白表达水平下降，抑制U251细胞的迁移和侵袭能力。 【关键词】 脑胶质瘤；RNA干扰；细胞增殖；肿瘤侵袭 Influenceofnutrient—depdvafionautophagyfactor-1ontheprolfierationandinvasionofhumanglioma celllineU251 JiangHanqing，LuoLun，LiangChaofeng．DepartmentofNeurosurgery，NingboMingzhou Hospital，Ningbo315000，China Correspondingauthor，LiangChaofeng，E—mail：lcfieff@163．corn A【bstract】 0bjective Toinvestigatetheeffectofnutrient．deprivationautophagyfactor-1(NAF1) upontheproliferationandinvasionofhumangliomacelllineU251．Methods Resuscitationofhumanglioma celllineU251wasconducted． ThecuhuredU251ceilsweredivided intothesi—NAF1，si—NC and control groups．CCK-8assaywasperformedtoassesstheproliferationofU251cells．Platecloningformationassaywas utilizedtoevaluatethefomr ationofcellcloning．Woundhealingassaywasconductedtoinvestigatethemirga- tionofU251cells．ChangesinthemirgationofU251cellsweredetemr inedbyTransweltinvasionassay．Re- suits TheexpressionofNAF1inU251cellstransfectedwiht NAF1-siRNAatbothproteinandRNAlevelswas significantlydown-regulatedcomparedwiththoseinsi—NCandcontrolgroups(bothP0．05)．Theproteinex— pressionofproliferatingcellnucleraantigen(PCNA)nadmatrixmetalloprotein-9(MMP-9)wassignificantly down—regulated．Theproliferation，formationofcellcloningandmirgationofU251cell