p16基因高表达对293细胞衰老的影响.pdfVIP

· 622 · 郑州大学学报 (医学版) 2014年 9月 第 49卷 第 5期 doi：10 13705／j．issn．1671I6825．2014．05．007 pl6基因高表达对 293细胞衰老的影响 马珊珊¨，刘 静¨，姚 宁¨，崔渊博¨，邢 衢¨，王梦然 ，郭天宇 ，杨 波 ，关方霞’’ 1)郑州大学生命科学学院干细胞实验室 郑州 450001 2)华东师范大学生命科学学院上海 200241 3)中山大学生命科学学 院 广州 510275 4)郑州大学第一附属医院 郑州 450052 样通讯作者：关方霞，女，1969年2月生，博士，教授，研究方向：干细胞与再生医学，E-mail：guanfangxia@126．tom；杨波，男，1963 年 1月生，硕士，教授，研究方向：中枢神经功能损伤与重建，E—mail：yangbo96@126．com 关键词 p16；高表达 ；细胞衰老；调控 ；293细胞 中图分类号 Q29l 摘要 目的：探讨 p16基 因高表达对 293细胞衰老的影响。方法 ：实验设正常组、空质粒组和高表达组 。RT— PCR扩增人 p16基 因，构建 p16基因高表达载体 ，利用脂质体将其转染 293细胞 。采用 CCK-8法和流式细胞术检 测 p16基 因高表达对293细胞增殖和细胞周期的影响，B-半乳糖苷酶染色法检测细胞衰老状态 ，RT-PCR和Western blot法检测 p16、p21mRNA和蛋 白的表达 。结果：p16基因高表达可抑制 293细胞 的增殖 ，并将细胞阻滞在 G0／G1 期 (F=158．057，P0．001)；高表达组细胞 p16和 p21在 mRNA和蛋 白水平 的表达明显增加 (F=73．467、54．988、 9．923、44．060，P均 0．05)，8一半乳糖苷酶阳性细胞率明显增加 (F=137．266，P0．001)。结论 ：p16基 因高表达 可抑制 293细胞 的增殖 ，将细胞阻滞在 G0／G1期，提高细胞 中p16和p21的表达 ，促进细胞衰老 。 Effectsofp16geneoverexpressionon293cellsaging MAShanshan“LIUring“，YAONing¨，CUIYuanbo“，XINGQu”，WANGMengran ，GUO Tianyu ， ， YANGBo ．GUAN Fangxia ，) J)StemCellLaboratory，SchoolofLifeSciences，ZhengzhouUniversity，Zhengzhou450001 2)Schoolof L Sciences，EastChinaNormalUniversity，Shanghai200241 3)SchoolofLifeSceinces，SunYat—senU— niversity，Guangzhou510275 4)TheFirstAffiliatedHospital，ZhengzhouUniversity，Zhengzhou450052 Keywords p16；overexpression；cellaging；regulation；293cell Abstract Aim ：Toinvestigatetheregulationofoverexpressionofp16geneonagingof293cells．Methods：Theex— perimenthad3groups：controlgroup，emptyplasmidgroup，andoverexpressiongroup．Thep16 genewasamplifiedbyRT— PCR toconstructthep16 geneoverexpressionvector，and thevectorwastransfected into293cells．CCK一8 assayandflow cytometrywereperformedtodetecttheeffectofp16geneoverexpressiononcellproliferationandcellcycle．B—galactosidase stainingwasused tode