一新型显微准弹性激光散射装置.pdfVIP

I|7 ．一一f7 生鞠桷理学报 第十四卷 第一期 一九九八年三月 ACTA BIOPHYSICA SINICA Vo1．14 No．I M ar．1998 一 新型显微准弹性激光散射装置 王江成 谭润初 李永龙 贺奇才 黄耀熊 一 ( 。 自 研i 州l510089) ／ 摘 要 设计并装配了一新型显擞准弹性教光散射暮王，经比较其主要性能优于同类仪器。利用此蓑王 测量 了标准泉苯乙烯球乳洼豆水溶性泉氨酯高泉物乳液．蛄果袁明测量精确可靠。利用此蓑王还研 究了正常人血红细胞，所测得的正常人红细胞内血红蛋白分子泉枭体的线鹿和腱运动筒率与文献 报遗的基本一致。证明本暮王可成功进行单十活细胞的细胞腱以置胞内分子豆其泉枭体动态特性 的非慢A 性测量。 美■词 ： 昱擞堆弹性激光散射 红细胞 血红蛋 白 细胞腱 动态特性 准弹性激光散射技术可在不干扰样品天然状态情况下 ，通过对样品散射光 自相关函数分 析，实现对样 品中分子或分子聚集体的大小 ．扩散系数 ，定向运动速度等动态特性的测量 。如 将激光微束后照射到单个细胞 内，在显微镜下观测细胞内的准弹性激光散射，还可测量单个 活细胞 内大分子及其聚集体的各种动态参数。 但是 ．显微准弹性激光散射技术 (MQLs)的实现 比较困难。主要因为散射体积很小 ，接近 衍射极 限，散射角的不确定度和散射波矢 的相对误差都较大 ，因而已见的报道不多 “。。其中 麻省理工学院 (M1T)将氮氟激光镳柬到直径约 2pm．后射入单个红细胞内，在直立显微镜下 观察。样品的散射光信号用一包埋于 目镜中的多模光纤收集，然后送到光 电倍增臂后送放大 器和相关器处理。他们利用此装置实现了对单个活体红细胞内血红蛋 白聚集体 以及肝细胞 内 微囊泡运动的非侵人性测量0。 ，显示 了此技术在揭示活细胞内分子动态特性的优势。MIT 装置的特点是散射体积小 [～ (2,am)】，使用方便，但其散射角不确定度较大 (±9。)，散射波 矢的相对误差大至 l7％，而且散射角不易变抉。 与MIT不 同．约翰霍普金斯大学(JHU)用光束直径约250vm 的氮氖激光照射数个到数 十个红细胞，然后以饲置显锻镜观察 。散射光通过一个 330~m针孔 ，目镜和另一个 2505m针 孔后 由光电倍增管接收 -。此设置可只选定某一个红细胞发出的散射光，且易于实现，散射 角也比较容易变换。其散射角不确定度约为 ±5．5，散射渡矢的相对误差约 10％ 。缺点是使 用不便 ，光学系统不易准直 ，且不能准确爿定散射光的来源 。此外 ，照射激光不是微束激光 ，还 不能对细胞 内较小区域 的散射光进行研究 。 针对以上两种MQLS装置的特点，我们认为，通过结音它们的优点，可以设计装配出一新 型MQLS装置，不但可 以提高性能，还可减少所需元器件，尤其使之更易于实现和操作方便， 以便更适用于对各种活细胞的测量。本文报道对此装置的具体设计 ，装置的设置和检验校正 ， 车交为所承担的国寡教委博士点基金资助项 目 ¨奉文联系^ 第 1期 一新型星微准弹性激光散射装置 173 以及利用此装置对正常人红细胞所进行的研究。 1 实 验 I．1 实验装置 如图 l所示 ，我们设计的MQLS装置包 括①激光微束系统 ；②样品保持及恒温系统 ； ③倒置显微镜 ；④光电接收及放大系统；⑤信 号相关处理及计算机分析系统等五个部分。