三维荧光光谱技术分析应用进展.pdfVIP

维普资讯 第 16卷第 6期 分 析 科 学 学 报 2000年 12月 Vol_16 No．6 JOURNALOFANAIYTICALSCIENCE Dec． 2000 文章编 号 ：1006—6144(2000)06—0516—08 三维荧光光谱技术分析应用进展 一 2L盎宝 ．叠鎏夔 D 7一， (武汉 大学化学系 -武汉 ，430072) 摘 要 ：奉文对三堆荧光技术 的发展厦其 分析应用作 了回顾 、评迷与展望 -引用文献 75篇 。 中：围分亏j：夕鳓一 识码A：：暑毛／指日’{a，主饭口文芋’，， 荧光分析方法 已成为倒行分析 的重要手段 。然而 ，随着分析对象的不断发展 、分析任 务的 日益复杂 ，传统 的荧光分析法 已很难满足要求 。因为传统的荧光发射 (激发)光谱 只是 在某一个激发 (发射)波长下扫描 ，而事实上 ，荧光是激发波长和发射波长两者 的函数 ，所 以这种传统 的荧光发射 (或激发)光谱并不能完整地描述物质 的荧光特征 。一个化台物荧 光信息完整 的描述 需要三维光谱才能实现 [I]。这是进行光谱识别 、表征 的必要条件 。另外 ， 对一个含多种组分的荧光光谱 (发射 ／激发)重叠的对象，传统 的峰值定量法很难解决组分 之间的干扰 问题 ，需要从对象更完全 的信息 中寻找选择性的区域 ，或结合其它的优化手段 才可能准确地实现多个蛆分的同时分析 。三维荧光法是近 2O多年发展起来的一 门新 的荧 光分析技术 ，这种技术能够获得激发波长与发射波长或其它变量 同时变化时的荧光强度 信息，将荧光强度表示为激发波长一发射波长或波长一时间、波长一相角等两个变量的函数 。 三维荧光光谱分别被称作三维荧光光谱 (Three-DimensionalFluorescenceSpectrum)、激 发一发 射 矩 阵 (Emission—Excitation Matrix)、总 发 光 光 谱 (TotalLum[nescence Spectrum)、等高线谱 (ContourSpectrum)等 [2]。图 1所示是典型的等角三维投影 图及其 等高线谱 图。 通 常 ，三维荧光 的三个 维度 是指荧光激 发 、发射波 长 和荧光 强度 ，它表 现的是 荧光 强 度随激发和发射波长 同时变化 的信息 一般获取三维荧光数据 的方法 ，是在不 同激发波长 位置上连续扫描发射光谱 ，并可利用各种绘 图软件将其 以等角兰维荧光投影 图(Ex—Em- If)或等高线光谱 (Ex—Era)等形式 图象化表现 。此外 ，电视荧光仪 (VideoFluorometer) 和 CCD照相技术 [5。等也是获取兰维荧光 的方法 。 除此之外 ，一些其它的荧光技术及联用技术也能获得三维数据 。三维 同步荧光 的三 个维度 分别 是波长 差 、发射 波长 和荧光 强度 ，它可以通 过在不 同的激发一发射 波长 差 下记 录发 射光谱获得 。相 分辨荧光是另 一种获 得三维荧 光 的技 术口]，其 相分辨荧 光强度 (PRFI)作为检测相角和发射波长 的函数 ，可在不 同的调制频率 m下作发射扫描而获得 。 相分辨三维荧光0则综台了相分辨荧光与三维荧光的优点 时间分辨一三维荧光 则是研 收书 日期 ，2000一O7一O7 l雷讯联幕人 ：蔫坎秀 516 维普资讯 第 6期 刘志宏等 ：三堆蹙光光谱技术分析应用进展 第 16卷 Fig·l 玎 pjcalisometrc【three-dimensionalprojection 【a)anditsCOntOurplot 【b) 究时间相关 的荧光过程 的有力工具 ，在不 同的时间对发光谱进行快速扫描 ，可获得这种类 型 的三维数据 ，其荧光强度是时 同和波长 的函数 激光激发 的运用加快 了这项技术