凝胶迁移实验 碧云天.pdfVIP

EMSA 探针生物素标记试剂盒 产品编号 产品名称 包装 GS008 EMSA探针生物素标记试剂盒 20次 产品简介： EMSA探针生物素标记试剂盒(EMSA Probe Biotin Labeling Kit)是一种通过Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (TdT)把生 物素标记的dUTP添加到单链DNA 3’末端，然后通过退火产生生物素标记的EMSA探针的试剂盒。通常DNA 的3’末端被标 记后不会干扰基于序列特异性蛋白结合的EMSA检测。 Terminal Deoxynucleotidyl Transferase (TdT)可以在不依赖于模板的情况下催化在DNA 的3’-OH端加上dNTP 的反应。关于 TdT催化双链DNA末端加dNTP 的反应效率，3’端突出的双链DNA要比平端或3’端缩进的双链DNA高很多。TdT催化单链 DNA末端加dNTP 的反应效率要比双链DNA高很多。在适当的条件下，TdT也可以催化RNA 3’末端加NTP 的反应。 本试剂盒适合标记纯化的单链DNA ，如果用于标记EMSA探针，可以在单链标记后再进行退火。 本试剂盒中提供了已经用生物素标记好的Biotin-Control Oligo ，可以用作检测DNA标记效率的对照。 如果每个标记反应的探针量为5pmol，本试剂盒可以用于20个标记反应。 包装清单： 产品编号 产品名称 包装 GS008-1 TdT Buffer (5X) 250µl GS008-2 TdT (10U/µl) 20µl GS008-3 Biotin-11-dUTP (5µM) 100µl GS008-4 Biotin-Control Oligo (0.4µM) 100µl GS008-5 Ultrapure water 1ml GS008-6 探针标记终止液 200µl GS008-7 TE 15ml GS008-8 退火缓冲液(10X) 150µl — 说明书 1份 保存条件： -20℃保存。 注意事项： 需自备用于检测探针标记效率的带正电荷尼龙膜，以及用于生物素检测的相关试剂。带正电荷尼龙膜(FFN12/FFN16)可 以向碧云天订购。相应的用于生物素检测的化学发光法EMSA试剂盒(GS009)也可以向碧云天订购。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 使用说明： 1. 准备工作： A. 取出TdT Buffer (5X)、Biotin-11-dUTP和Ultrapure water溶解，并置于冰浴上备用。 B. 取出待标记的单链EMSA探针，用水稀释至1µM，并置于冰浴上备用。如果待标记的EMSA探针为双链，95 ℃加热2 分钟，然后立即放置到冰水浴中，使双链的EMSA探针转变为单链的探针，然后同样用水稀释至总的单链DNA浓度为 1µM，即每条单链的浓度为0.5µM，相当于最初双链的EMSA探针浓度为0.5µM 。 2. DNA探针的标记： Ultrapure water 29µl TdT Buffer (5X) 10µl 待标记探针(1µM) 5µl Biotin-11-dUTP (5µM)