分子荧光.pptVIP

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分子荧光.ppt

基本原理 一、分子荧光简介 二、分子荧光的特点 1.灵敏度高 单位浓度产生的信号量大,常见的最灵敏 方法,单分子测定 2.选择性好 即共存组分对被测组分的干扰小。仪器分析与化学 分析相比较主要优点为选择性好。如光谱定性、定量。 3.样品用量少 三、荧光与结构 五、仪器结构流程 * 分子荧光光谱法 当一种吸收物质吸收电磁辐射后跃迁到高能态,它的寿命约为10-10~10-9秒,在一般情况下,受光激发的粒子预系统中的其它粒子有一系列碰撞并将激发能转化为热,此为无辐射跃迁。某些情况下,被电磁辐射激发到高激发态的粒子很快通过碰撞失去振动能到达第一电子激发态的最低振动能级,然后发射电磁辐射。 通过光激发物质再发光的现象为荧光。由此方式得到的光谱为荧光光谱。 荧光是一种光致发光现象。 S2 S1 S0 T1 吸 收 发 射 荧 光 发 射 磷 光 系间跨越 内转换 振动弛豫 能 量 l 2 l 1 l 3 外转换 l ?2 T2 内转换 振动弛豫 1.跃迁类型:?* → ?的荧光效率高,系间跨越过程的速率常数小,有利于荧光的产生; 2.共轭效应:提高共轭度有利于增加荧光效率并产生红移 3.刚性平面结构:可降低分子振动,减少与溶剂的相互作用,故具有很强的荧光。如荧光素和酚酞有相似结构,荧光素有很强的荧光,酚酞却没有。 四、荧光谱图 测量荧光的仪器主要由四个部分组成:激发光源、样品池、双单色器系统、检测器。 特殊点:有两个单色器,光源与检测器通常成直角。 基本流程如图: 单色器:选择激发光波长的第一单色器和选择发射光(测量)波长的第二单色器; 光源:灯和高压汞灯,染料激光器(可见与紫外区) 检测器:光电倍增管。

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