抗可提取性核抗原（ENA）抗体检测试剂盒（20人份）.doc

抗可提取性核抗原（ENA）抗体检测试剂盒（20人份） 用途： 采用免疫双扩散法检测病人血清或血浆中的抗可提取性核抗原(Extractable Nuclear Antigen ENA)抗体，帮助诊断和鉴别诊断风湿性疾病。临床意义和检测原理： 自身抗体的检测对风湿性疾病的诊断有重要意义，其中某些抗体还同疾病活动性相关，因此可指导临床用药和评估疾病的预后。可提取性核抗原，其主要成分包括U1-RNP、Sm、SSA、SSB、Scl-70、Jo-1等抗原，相应抗体的检测对于风湿性疾病的诊断和鉴别诊断有极为重要的意义。如抗Sm、抗Scl-70和抗Jo-1抗体分别为系统性红斑狼疮（SLE）、系统性硬化症（SSc）和多发性肌炎/皮肌炎（PM/DM）的标记抗体。抗U1-RNP（nRNP）常与雷诺症状相关，其高滴度有利于混合性结缔组织病（MCTD）的诊断。抗SSA、SSB抗体与口、眼干燥症状密切相关。 免疫双扩散法（Immunodiffusion ID）是鉴定抗原抗体最基本的方法之一。其原理是在琼脂糖凝胶内抗原和抗体各自向对方扩散，在恰当的比例处形成抗原抗体复合物沉淀线。在阳性抗体对照的参与下，观察沉淀线的位置、形状以及对比关系，可对抗体作定性或半定量判断。本实验采用梅花孔法检测，是目前国际上检测抗ENA抗体的经典方法，特异性最高。有的被纳入美国风湿病学会（ACR）风湿病的诊断标准中。 试剂盒组成 规格 数量 抗原A（Sm、U1-RNP）（冻干粉，第一次使用前加入0.6蒸馏水溶解） 对照A（抗 Sm、U1-RNP抗体）（直接使用）/支 1支 抗B（SSA、SSB）（冻干粉，第一次使用前加入0.6蒸馏水溶解） /支 1支 标准对照B(抗SSA、SSB抗体（直接使用） 0.6/支 1支 抗原C（Scl-70）（冻干粉，第一次使用前加入0.6蒸馏水溶解） 0.6/支 1支 标准对照C（抗Scl-70抗体）（直接使用） 0.6/支 1支 抗原D（Jo-1）（冻干粉，第一次使用前加入0.6蒸馏水溶解0.6ml/支 1支 标准对照D（抗Jo-1抗体）（直接使用） 0.6/支 1支 密封的琼脂糖凝胶板（梅花孔）标本的采集处理和保存：待测标本最好是新鲜采集的病人血清或血浆，若当时不检测，可将血清或血浆分离出来，置＋2℃～＋8℃冷藏保存一周内检测结果仍然可靠。凡黄疸、脂血、溶血或细菌污染标本不可检测，若标本中有微粒可低速离心后取上清检测。 5、操作步骤： 将试剂盒从冰箱取出，根据待测标本数取出相应数量琼脂糖凝胶板（每两份标本需4块板），恢复至室温后，将盖子揭开。 从冰箱冷冻室内取出抗原（第一次使用前加入0.6ml蒸馏水溶解混匀）后恢复至室温融化，在4块凝胶板的中央孔内加入相应4种抗原，加满为宜（25(40 /孔）。 分别在4块凝胶板的上下两孔内加入相应4种标准对照，加满为宜（15(25μl /孔）。 在4块凝胶板的左侧两孔加入一份原倍待测标本，加满为宜（15(25μl /孔）。 在凝胶板的右侧两孔加入另一份原倍待测标本加满为宜（15(25μl/孔 将凝胶板盖子严密合上，置室温下反应24小时。 在灯光下，（揭去盒盖）使凝胶板介于眼睛和灯光之间，观察结果。 6、结果判断： 肉眼观察标准对照抗体和抗原之间是否出现白色免疫复合物沉淀线，如有沉淀线说明实验成功，A和B的板应有两条沉淀线，C和D的板有一条沉淀线。 进一步观察待测血清与抗原孔之间有无沉淀线，如没有沉淀线或出现的沉淀线与标准对照抗体的沉淀线相交叉则为阴性。 出现与标准对照抗体相连接、圆滑吻合的沉淀线则为阳性，即与标准对照抗体相同。 检测抗原A的凝胶板内，Sm抗原抗体复合物沉淀线靠近外侧血清孔，而U1-RNP抗原抗体复合物沉淀线靠近中央抗原孔，以此区别。B的凝胶板内SSB抗原抗体复合物沉淀线靠近外侧血清孔，而SSA抗原抗体复合物沉淀线靠近中央抗原孔，以此区别。 使用注意事项： 检测抗ENA六项抗体需4块板，能同时检测2份待测标本，故每袋包装（8块凝胶板）可检测4份标本 抗原复苏后和标准血清中会有沉淀出现，使用时应先混匀再加样。 48小时后观察。 在台灯下观察结果时有时为了更好的判读，可将孔内残留抗原和血清用蒸馏水轻轻冲洗掉，注意保证凝胶的完整。 本试剂盒也可以作半定量的滴度检测，将待测标本稀释后操作同上。 在结果观察中，抗体的出现有一定的规律性：一般情况下，当抗Sm抗体阳性时，抗U1-RNP抗体也同时阳性；当抗SSB抗体阳性时，抗SSA抗体也同时阳性…）。 对照血清经过HBsAg、抗HCV抗体、抗HIV抗体检测，均为阴性，但试剂盒的所有组分都应视作潜在传染源小心处理。 保存环境及有效期：试剂盒中抗原须置-20℃保存，其余置＋2℃～＋8℃保存，有效期为1年。