双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术研究进展.pdfVIP

·9· 双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术研究进展 郭 慧 邓文星 张 映 (山西农业大学太谷030s01) 摘要双向聚丙烯酰胺凝胶电泳按等电点和分子量对蛋白质进行分离，具有很高的分辨率，已经成为蛋白质组研究中的核心技 术之一。本文对双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术的原理、检测步骤进行介绍，并对其存在问题与发展进行简要介绍。 关键词双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2D—PAGE)染色 双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术(two—dimensional2D—PAGE技术主要包括样品制备、双向电泳、凝 polyaerylamidegelelectrophoresis，2D—PAGE)作为一胶的染色以及图谱分析等步骤。 2．1 种分离和检测复杂生物体系中蛋白质的方法由OFar- 样品制备样品制备主要包括组织或细胞的破 rell等于1975年首先提出。该技术是目前常用的并碎、失活或者去除干扰物质、蛋白质增溶溶解等步骤， 且是唯一的一种能够连续在同一块胶上分离数千种蛋 以充分破坏蛋白质之间的相互作用，最大限度地提取 白质的方法，被广泛应用于生物学研究的各个方面。 生物体细胞、组织或器官的蛋白质，并保持其较好的溶 2D—PAGE技术联合质谱技术和生物信息学技术，很解性，除去其中的非蛋白质组分，与此同时，还要尽量 大程度上提高了蛋白质分析的分辨率和精确度，将蛋 避免对蛋白质产生化学修饰。但到目前还没有一种能 白质组研究提高到一个新的水平…1。 广泛用于各种生物样品制备的方法。就目前研究状况 1 2D—PAGE技术原理 而言，从双向电泳胶上分辨出来的蛋白质分离得还是 2D—PAGE技术由任意两个单向聚丙烯酰胺凝胶不充分的，特别是疏水蛋白质L3|。 电泳组合而成的，在第一向电泳后再在与第一向垂直 为简化样品复杂度，富集特定的蛋白如低丰度蛋 的方向上进行第二向电泳[2l。目前，双向聚丙烯酰胺 白或膜蛋白，样品制备中现常采用预分级处理法，如顺 foeu- 凝胶电泳大都为第一向为等电聚焦(isoeleetric序抽提法、色谱法、激光捕获微切割技术(1asercapture sing，IEF)，将蛋白质沿pH梯度分离至各自等电点(i— soeleetric 择性沉淀法等【4J。对于不同的样品性质及研究目的， point，pI)，通过电荷分离蛋白质；第二向为十 二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium 其制备方法也不尽相同。根据样品的不同性质，可选 dodecyl gel 择具有单一增溶作用的溶液，也可用含多种分离液剂、 sulphatepolyacrylamideelectrophoresis，SDS— PAGE)，通过分子量分离蛋白质。样品经过电荷和质去垢剂和还原剂的复杂混合液进行处理。用于样品处 量两次分离后，所得蛋白质二维排列图中每个点代表 理的缓冲液必须在低离子强度的基础上，既能保持蛋 样本中一个或数个蛋白质。 白质的天然电荷，又能维持其溶解性。因此，绝大多数 2 2D—PAGE技术步骤 样品往往都需要通过多次实验才能摸索到最适宜的条 don．AnnualReviewof 主要参考文献