引物原位地高辛标记在绒毛细胞中快速检测Y染色体专性序列RapidDetectionofYspecificSequenc.pdfVIP

遗传HEREDITAS(Beijing)18(5):43-451996 引物原位地高辛标记在绒毛细胞中 t决速检测Y染色体专性序列① 李立家 张锡元 周东风 武（汉大学生命科学学院，武汉430072) 同（济医科大学协和医院，武汉430030) 摘要 本文报道了以人绒毛细胞为材料，利用人类Y染色体特异片段的一对扩增引物Y，和 Y,，以地高辛 D（igoxigenin）为标记物，在玻片上进行细胞内引物原位延伸标记，进而快速检测 Y染色体专性序列的实验结果． 关键词 细胞引物原位标记，地高辛，Y染色体专性序列 RapidDetectionofY-specificSequencesinChorionicvilli CellbyPrimedinsituDigoxigeninLabeling LiLijia ZhangXiyuan (CollegeofLifeScience,WuhanUniversity,Wuhan430072) ZhouDongfeng (UnionHospital,TongjiMedicalUniversity,Wuhan430030) AbstractByusingprimersthatgenerateDNAsegmentsspecificforthehumanYchromosome,wehave successfullycarriedoutprimedinsituDigoxigeninlabelingatsingle-celllevelontheglassslides.Theex- tremespeed,simplicityandsafetymakeitpossibletobeusedtodetectsexanddiagnosischromosomedis- order KeywordsPrimedinsitulabelingincell,Digoxigenin,Y-specificsequences 临床上，产前胎儿性别鉴定以及某些染色体病的诊断与研究，早期的方法主要借助于染色体检查，即检查妊 娠中期羊水细胞或早期绒毛细胞的染色体而作出早期诊断 ）〔‘，但此方法存在很多不足之处，近年来，原位杂交 技术广泛应用于临床上，这主要归功于非放射性标记物的使用和发展 3（)．Julien等人⑥用荧光原位杂交法产前 诊断Downs综合征，其他染色体异常疾病一般能用各种非放射性原位杂法进行产前诊断 4（,8)，但这些方法都 需要制备标记探针而且费时。PCR技术以其快速、简便及灵敏等特点而在医学上得到广泛应用 2（)，但无法获得 细胞组织结构信息，且往往需要制备模板DNA，同时必需一定的PCR设备． Koch等人 7（)1989年建立发展了一种引物原位标记技术 P（rimedinsituDNAlabeling,PRINS）来定位 检测特异DNA片段．其原理是利用特异引物与变性染色体专性序列退火互补，在KlenowDNA聚合酶催化 下，将生物素标记的核昔酸原位掺人到合成的DNA中，据此可以检测出引物延伸的位置及信号．1992年， Terkelsenm等 l（o)在PRINS基础上建立了引物原位重复多次标记技术，提高了信号强度．最近，我们实验室在 ①国家自然科学基金资助的课题． 44 遗 传 HEREDITAS(Beijing)1996 18卷 细胞内原位PCR扩增特异片段也获得成功 (11)．本研究使用PRINS方法．以地高辛为标记物，以Taq酶代替 Klenow酶，用少量绒毛细胞为材料制片，直接在细胞中原位延伸标记检测Y染色体特异信号． 1材 料 和 方 法 1.1引物Y3和Y4 上海复旦大学遗传学研究所设计合成，长度均为23bp，用来专性扩增人Y染色体上特异DNA片段，扩增 产物大小为446bp. 1.2主要试剂 DigDNALabelingandDetectionKit(c