2012届金榜提名第一轮复习（生物课件）：实验26.pptVIP

实验设计专题研究系列之(二十六) 有关基因工程的探究 实验专项 1．探究目的基因插入质粒上的位置情况：若运载体上含抗青霉素基因a和抗四环素基因b，当目的基因插入a片段中，则该基因不表达，在青霉素培养基上不存活，在四环素培养基上存活；若插入b基因片段，则结果相反。 2．探究质粒上抗性基因的情况 (1)方法：将重组后的质粒导入受体细胞，分别放在含青霉素、四环素的培养基上培养，观察成活情况。 (2)现象结论：①都成活——两种标记基因都有；②只有一个培养基上成活——只有其中一种，抗青霉素基因或抗四环素基因；③都不成活——两种抗性基因都不存在。 【典例示范】 (2010·浙江五校联考)大肠杆菌pUC118质粒的某限制酶唯一酶切序列，位于该质粒的lacZ基因中，lacZ基因中如果没有插入外源基因，lacZ基因便可表达出β半乳糖苷酶，当培养基中含有IPTG和Xgal时，Xgal便会被β半乳糖苷酶水解成蓝色，大肠杆菌将形成蓝色菌落；如果lacZ基因中插入了外源基因，带有pUC118质粒的大肠杆菌便不能表达β半乳糖苷酶，培养基中的Xgal不会被水解成蓝色，大肠杆菌将形成白色菌落。pUC118还携带了氨苄青霉素抗性基因。下图是利用lacZ基因的插入失活筛选重组质粒示意图。据图回答下列问题： (1)作为受体，大肠杆菌应_________________________________， 以方便筛选已导入重组质粒的受体大肠杆菌。取用氯化钙溶液处理(增加其细胞壁的通透性)过的受体大肠杆菌，置于试管Ⅱ中，并加入__________________________________________________________。 (2)图中的选择培养基中除含有大肠杆菌必需的葡萄糖、氮源、无机盐、水、生长因子等营养物质外，还应加入________________等物质，用以筛选导入了重组质粒的受体大肠杆菌。 (3)将上述处理后的大肠杆菌置于图中选择培养基上培养，以检测受体大肠杆菌是否导入重组质粒，请预测菌落的颜色，并分析结果： ①______________________________________________________ _______________________________________________________。 ②_________________________________________________ ______________________________________________________。 思路分析：(1)从图中看出：质粒上有氨苄青霉素抗性基因，为方便筛选，已导入重组质粒的受体大肠杆菌应不含氨苄青霉素抗性基因。 (2)选择培养基中加入IPTG和Xgal以便显色反应，同时加入氨苄青霉素作为选择作用。 (3)根据题干显色反应现象，若长出蓝色说明重组质粒没有导入受体大肠杆菌；若长出白色菌落，说明重组质粒已导入受体大肠杆菌。 答案：(1)不含氨苄青霉素抗性基因(或对氨苄青霉素敏感)　在试管Ⅰ中制备好的DNA (2)IPTG、Xgal、氨苄青霉素 (3)①如果长出蓝色菌落，说明自连的载体pUC118质粒已转入受体菌，但目的基因没有接入载体(或说明重组质粒没导入受体大肠杆菌) ②如果长出白色菌落，说明重组质粒已导入受体大肠杆菌 【实战演练】 (2010·江苏卷)下表中列出了几种限制酶识别序列及其切割位点，图1、图2中箭头表示相关限制酶的酶切位点。请回答下列问题： 图1　　　　　　　　　　　　图2 (1)一个图1所示的质粒分子经SmaⅠ切割前后，分别含有______个游离的磷酸基团。 (2)若对图中质粒进行改造，插入的SmaⅠ酶切位点越多，质粒的热稳定性越______。 (3)用图中的质粒和外源DNA构建重组质粒，不能使用SmaⅠ切割，原因是__________________________________________________。 (4)与只使用EcoRⅠ相比较，使用BamHⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质粒、外源DNA的优点在于可以防止 ___________________________________________________ ____________________________________________________。 (5)为了获取重组质粒，将切割后的质粒与目的基因片段混合，并加入____________酶。 (6)重组质粒中抗生素抗性基因的作用是为了_______________。 (7)为了从DNA文库中分离获取蔗糖转运蛋白基因，将重组质粒导入丧失吸收蔗糖能力的大肠杆菌突变体，然后在____________的培养基中培养，以完成目