反相高效液相制备色谱分离酪蛋白磷酸肽.pdfVIP

2002年第4期 分 析 仪 器 19 于车用汽油和航空汽油 中苯及 甲苯含量 的测定 (3)通过调节针形阀 1的开度 ，可实现反吹速 (6 MD3606—1996)。从 图中可 以看 出，只要更换 度的改变。 色谱柱 ，系统可 以用于任何需要反吹的分析方法。 (4)通过调节针形阀2，可实现分析速度或分离 系统的主要特点是 ： 度的调整。 (1)使用的部件是气相色谱仪实验室的常备器 (5)操作和有阀切换一样 ，不必改变一般的操 件。 作习惯。 (2)虽然使用了六通阀，但无需将阀放在柱箱 (6)改装成本低 ，易于实现。 中，反吹时虽和部分样品接触，但不影响被分析组分 的测定。 收稿 日期：2002—05—3l 庞增义，男，高级工程师，主要从事气相色谱仪的研制工作。 业 业 ； 仪器分析 ：} 芥 芥 带 带 带 芥 莽 带 反相高效液相制备色谱分离酪蛋白磷酸肽 周杏琴 ‘王博诚。 冯凤琴 (1．核医学国家重点实验室 江苏省原子医学研究所，无锡，214063： 2．无锡轻工大学食品工程系) 摘 要 介绍了用反相 Cl8液相制备色谱柱分离生物活性肽酪蛋白磷酸肽的方法。经过两次不同梯度的洗 脱，得到了4种不同组分的酪蛋白磷酸肽。经过氨基酸分析仪测定，确定了其中3种的分子结构，分别为 l(62— 79)、asl(43—79)、口(7—24)。 关键词 反相高效液相制备色谱 酪蛋白磷酸肽 1 前 言 2 实验部分 酪蛋 白磷酸肽 (caseinphosphopeptides，CPP)是 2．1 仪器与试剂 一 种含有磷酸丝氨酰基的肽 ，能促进大肠 内钙 的吸 Bio—Rad5000HILC，7125手动进样器，Bio- 收和利用 ，可用作食品、饮料及营养保健品的添 Dimension二极管阵列检测器 。乙腈为 HPLC级， 加剂，预防各种缺钙症 J。但不同结构的CPP对钙 三氟乙酸 、乙酸铵为分析纯，水为超纯水 。所有溶剂 的结合能力不同HJ。要进一步研究CPP的组成及 都经过0．45t~m的过滤器过滤并脱气。 其分子结构 和功能性 质，必须得到肽链较短 的 2．2 色谱条件 CPP。 色谱柱 ：Hi—PORERP一318，250×21．5mm． CPP的生产过程分为酪蛋 白的酶水解和 CPP 孔径30nm，粒度 10～15nm，LOOP管 1mL。检测波 分离两步。曾有文献报道_5J，用胰蛋 白酶在较高温 长 215nm，检测灵敏度 0．05AUFS，流速 3．0mL／ 度下反应，采用较高的E／S，反应较长时间，可以得 min，柱压 16 ／cm2。 到 l(59—79)和t3(2—25)。本实验采用反相Cl8高 第一步，流动相采用含三氟 乙酸的水溶液与含 效液相制备色谱柱，分离不同结构的CPP，得到了 三氟 乙酸的乙腈溶液，梯度洗脱；第二步，流动相采 肽链较短的CPP。 用含 乙酸铵的水溶液与含 乙酸铵的乙腈溶液，梯度 20 分 析 仪 器