发光二极管诱导荧光用于毛细管电泳检测.pdfVIP

( ) 第 31 卷 分析化学 FENXI HUAXUE 　研究简报 第 9 期 　　　　　　　　　　 　 　　　　　　　　 　　　 2003 年 9 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 1066～1068 研 究 简 报 发光二极管诱导荧光用于毛细管电泳检测 杨丙成　谭　峰　关亚风 ( 中国科学院大连化学物理研究所 ,大连 116012) 摘 　要 　利用发光二极管作为激发光源 ,组装了用于毛细管电泳的荧光检测器。光纤用于传输荧光信号 ;光 纤端面修饰成球形使耦合效率比平面端光纤提高了 50. 8 % ;光阑、光纤及毛细管检测池之间的光学校准简 单、便捷。荧光素染料用于评价该体系性能 ,得到了fmol 的质量检出限。 关键词 　发光二极管 ,诱导荧光检测 ,光纤 ,荧光素 1 　引　　言 荧光 ( ) ( ) ( fluorescence , Fl 检测 , 尤其是激光诱导荧光检测 LIFD , 是毛细管电泳 capillary electrophoresis , CE) 中常用的高灵敏检测技术。尽管LIFD 具有极高的灵敏度 ,但激光器成本高 ,体积 大 ,能耗高的缺点在很大程度上限制了LIFD 的应用。半导体激光器具有体积和成本优势 ,但目前其发 ( 射波长主要局限在长波区 ,在此区域很难找到合适的商品荧光染料。发光二极管 lightemitting diodes , ) ( ) ( ) LEDs 具有输出功率稳定、能耗低、体积小、适当高的亮度 ～5000 mcd 、寿命长 ～100 万 h 等优点 ,非 常适合于微型化仪器。近年来 ,LEDs 应用于 CE 检测逐渐引起了人们的关注 ,但主要是集中于吸收检 测1 ,2 ,荧光检测报道的还非常有限3 ,4 。 本文探讨了利用高亮度LED 应用于荧光检测的可行性。为增加装置的灵活性 ,采用光纤接收荧光 信号 , 以荧光素为标样评价了该体系,结果表明 :其性能达到了常规荧光检测器的指标。 2 　实验部分 2. 1 　电泳操作 自组装了一简易CE 装置。高压电源 :0～30 kV ;虹吸进样 :10 cm5 s ;分离场强 :300 Vcm ;毛细管 : ( ) ( ) 0. 1 mm i. d. ×6045 cm 总长有效 河北永年光导纤维厂 。 2. 2 　设备与试剂 光纤 :纤芯200 μ μ ( ) m包层220 m Polymicro Technologies ;LED : 中心波长470 nm ,波长半宽度 FWHM 20 ( ) ( ) ( ) nm ,亮度～3000 mcd 深圳世峰光电 ;光电倍增管 PMT :R446 Hamamatsu , Japan 。为消除新的LED 固 5 有的低频噪声 ,根据文献 对LED 进行“老化”处理。 荧光素 , 国产分析纯 ,用 25 mL