实验一 分光光度法.pptVIP

实验一 分光光度法 * 1. 学习分光光度计的使用方法 2. 掌握分光光度法测定未知溶液中蛋白质 的浓度 实验目的 一、紫外分光光度法--- 蛋白质浓度测定 标准比较法 分光光度法原理 朗伯-比尔定律: 吸光度 液层厚度 A=κ·d · c 摩尔吸收系数 溶液浓度 C未知 = A未知 A标准 ×C标准 蛋白质分子中酪氨酸、色氨酸残基的苯环 含有共轭双键，在紫外280nm处有最大吸收峰，吸收值与浓度成正比。 用1cm石英比色杯，在280nm处测吸光度A，用标准蛋白对照法测定蛋白浓度。 实验步骤 空白管 标准管BSA 样品管 生理盐水 牛血清白蛋白 未知蛋白质 C标准=500μg/mL C未知=（计算） A标准=（测定） A未知=（测定） 先用空白管调零，在280nm处测已知浓度为C标准的标准溶液的吸光度A标准、未知样品的吸光度A未知，未知样品的浓度C未知可按公式求得。 注意事项 1. 石英比色杯装3/4溶液 2. 拉杆第1格（近自己）---空白管 3. 开关“T”---开盖调%旋钮→0.00 盖盖调%旋钮→100.0 4. 开关“A”---吸光度调“零”旋钮→0.00 5. 拉杆读第2格（标准管）的吸光度A标准 拉杆读第3格（样品管）的吸光度A未知 根据公式计算未知蛋白质的浓度 C未知 = A未知 A标准 ×C标准 二、可见分光光度法 检测有色溶液吸收光谱 掌握单光束分光光度计检测有色溶液吸收光谱的方法 实验目的 实验器材 紫外 / 可见分光光度计（752-S型） 兰色葡聚糖2000溶液 坐标纸 实验原理 1. 可见光谱分析要求被测溶液的颜色与所用的单色光互补，以求达到溶液对光的最大吸收 2. 紫外可见分光光度计是利用物质对光的有选择吸收现象，对物质进行定性和定量分析，可在一定波长范围内扫描出溶液的吸收光谱图 3. 兰色葡聚糖2000溶液最大吸收峰为620nm 实验步骤 开盖，开机预热20分钟 2. 设定起始波长500nm 3. 置入空白，样品 4. 调 0%T 5. 盖盖，调 100%T 6. 置模式为“吸光度(A)”调0 7. 样品置入光路 8. 读取A值后开盖 9.依次选择波长：550nm、 620nm 、 650nm、700nm、750nm 10. 置模式为透射比(T) 11. 重复3~9步骤 12. 取坐标纸，以波长为横坐标，以对应的吸光度(A)为纵坐标绘制吸收光谱图 *