大肠杆菌离子束诱变及rpoB基因两个新的利福平抗性位点鉴定.pdfVIP

卷 期 ! # 微 生 物 学 报 ’() *! 1( *# 年 月 $%% $ !#$ %’()(*(+$ ,-$ +,-,./,0 $%% !!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!! 大肠杆菌离子束诱变及 ’. (/ 基因 两个新的利福平抗性位点鉴定 谢传晓 姚建铭 潘仁瑞 吴李君 余增亮 （中国科学院等离子体物理研究所 离子束生物工程学重点实验室 合肥 $%%） #% 摘 要：以 D(5 射线辐照为参照体系，研究了低能氮离子诱发大肠杆菌利福平抗性突变。 ! 结果表明，低能氮离子注入具有损伤轻而突变率较高的特点。碱基置换型突变与其检出频率 分析表明， 、 、 转换与 颠换为低能氮离子诱发大肠杆菌活体细 DE#4F ED#F4 F4#ED F4#4F 胞内的高频突变，占检出总突变数的 （ ）。并鉴定出大肠杆菌 基因中两个新 3B G6 H BBI33 !#$ 的利福平抗性决定位点。位点一位于 位鸟嘌呤脱氧核苷酸（ ）被胞嘧啶脱氧核苷酸 66 JE （ ）取代，导致 （谷氨酰胺残基）被 （组氨酸）替代；位点二位于 的胞嘧啶脱 JD E)A6B K;L #2$ 氧核苷酸（ ）被胸腺嘧啶脱氧核苷酸（ ）替代，导致 （脯氨酸残基）被 （亮氨酸） JD J4 M0(6#! N, 取代，使突变子产生抗性。其中位点一还未见报道，位点二的同义突变已有报道，但 #2$ 位 点 到 的核苷酸突变并没有得到鉴定。 D 4 关键词：离子束诱发突变，利福平抗性，大肠杆菌， 基因 !#$ 中图分类号： ， 文献标识码： 文章编号： （ ） O2 O#2 F %%%5#$%2 $%% %#5%B$5%3 离子束特别是低能氮离子束对微生物与植物种子有很强的致突变作用，并被应用于 ［］ 微生物诱变及植物育种研究，取得巨大的经济与社会效益 。但低能氮离子束诱变的特 ［］ 异性及其相关机制研究尚有待完善。杨剑波等$ 利用 %’( 构建子裸露+1F 辐照后转染 大肠杆菌，并对回复突变子进行了序列分析，得出一些有意义的结果。但+1F 分子在活 体细胞内与多种蛋白质结合，并具有不同的构象。本研究旨在通过建立活体细胞内离子 束诱发+1F 序列突变分析的方法，鉴定活体细胞内+1F 序列特别是碱基置换型突变谱。 ［，］ ! 抗生素利福平有抑制细菌P1F 聚合酶的功能 。大肠杆菌 !#$ 基因编码P1F 聚 合酶 亚