猪肝组织核酸的分离纯化及鉴定.pdfVIP

《湖北畜牧兽医》月刊 邮发代号38—352 ———■——■●———■—■■■——■—麓_蝴榔删鞫倒鳓嘲辫躺黼鳓糍辫撕#僦彬嘲貔@％卿㈣… HUBEI OFANIMALANDVETERINARYSCIENCES JOURNAL 猪肝组织核酸的分离纯化及鉴定 周之超．石明明 (武汉大学生命科学学院生物学基地班，武汉430072) 摘要：利用盐溶法分离制备动物基因组DNA和RNA的方法，并对实验过程进行改良和分析。实验中选用新鲜猪肝作 为实验材料．根据核糖核蛋白与脱氧核糖核蛋白在一定浓度的氯化钠溶液中的溶解度不同进行分离．利用SDS裂 解，氯仿、异戊醇抽提，分离得到猪肝脏中基因组DNA和RNA；同时．通过脱氧核糖和核糖的显色反应定性区分了 DNA和RNA；实验最后利用紫外分光光度法和二苯胺法定量测定了DNA样品中的DNA的含量。 关键词：核酸；DNA；RNA；地衣酚显色法；二苯胺显色法 中图分类号：Q503；Q52 文献标识码：A 文章编号：10cr7—273X(2009)08--0007-03 核酸通常与蛋白质结合形成核蛋白存在于细胞中．是生 1．2．2RNA的粗提①接上面的第一步．在上清中加入等 命的基本物质之一，具有储存、传递生物体遗传信息的功能， 体积的氯仿／异戊醇置于带塞烧瓶中振荡．冰浴30min；②将 也是蛋白质合成不可缺少的物质。在生物的生长、遗传、变异 混合物转移至1．5mLEP管中，4℃、12000f／rain离心15rain． 等生命过程中起着重要的决定作用。核酸分为两大类一核糖 将上清液移至另一EP管中；加异丙醇，在冰上放置15min． 核酸(RNA)和脱氧核糖核酸(DNA)。 3000r／min离心10min，得到RNA沉淀阶】。 核酸的基本组成单位是核苷酸．是由众多的核苷酸缩合 1．3核糖核酸和脱氧核糖核酸的显色 而成的多聚核苷酸。核苷酸经过水解可以得到含氮碱、戊糖 D一核糖核酸+浓盐酸+地衣酚——反应显绿色 和磷酸。 D一2一脱氧核糖核酸+酸+二苯胺——反应显蓝紫色 l-3．1 lmL 真核生物基因组DNA和RNA广泛应用在动、植物的遗 DNA显色 SC溶液溶解DNA．然后转移到50mL 0．01mol／L 传育种基因图谱的构建、品种鉴定、物种形成和系统演化等 离心管中．用9mL NaOH溶液溶解．4000r／min离 方面的研究中，无论是基因T．程．还是蛋白质工程．核酸分子 心lOmin，上清转移到试管中备用。各取上述lmLDNA溶液 都是这些技术应用所涉及的主要对象．所以DNA和RNA的于两只试管中．其中一只里面加入3mL地衣酚试剂．然后置 分离与提取是分子生物学研究中重要的基本技 沸水中20min，观察颜色反应；另外一只试管中 术…。 ． 加入2mL二苯胺试剂．60℃条件下反应1h．观 1材料和方法 察颜色反应。 1．1 材料 1．3．2RNA显色将RNA沉淀用2mL蒸馏水 供试材料为冷冻的新鲜剪碎猪肝49[2]。所 溶解，然后转移至2只试管中，每只lmL。其中 用试剂为SC缓冲