奶牛乳房炎3种主要致病菌三重PCR检测方法的建立.pdfVIP

固锄场耗殿 奶牛乳房炎3种主要致病菌三重 PCR检测方法的建立 陈亚明，杜玉兰，聂 培，任怡静，贺 婷，杜向宏，杨 蓉，左宗辉，何宝祥 (广西大学动物科学技术学院，广西南宁 530001) 摘 要：金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和蜡样芽孢杆菌是引起奶牛乳房炎的三种常见致病菌，本研究根据金黄色 葡萄球菌的nuc基因、大肠杆菌的16S．23SrRNA基因和蜡样芽孢杆菌的hblA基因，设计合成3对特异性引物， 通过单纯PCR和多重PCR体系和条件优化，建立奶牛乳房炎主要致病菌三重PCR检测方法，并对 5O份临床乳 房炎乳样分别用传统细菌学培养法和三重PCR方法进行对比检测。结果：建立的三重PCR方法能对同一样品中 的3种病原菌以及与沙门氏菌等其他6种细菌的DNA模板进行扩增，均无交叉反应。对金黄色葡萄球菌、大肠 杆菌和蜡样芽孢杆菌的检测灵敏度分别为0．1pg／uL、0．01pgu／L、0．1pg／uL。该PCR方法对50份临床乳房炎乳样 检测结果，表面该方法的检 出率比传统培养法的高。 关键词：质奶牛；乳房炎；PCR；诊断；致病菌 中图分类号：$855．1 文献标识码：A 文章编号：1005—944X (2014)07—0082—04 DevelopmentofaTriplexPCRAssayforDetectionofThreeMajor BovineM astitisPathogens ChenYaming，DuYulan，NiePei，RenYijing，HeTing，DuXianghong，YangRong，ZuoZonghui，HeBaoxiang (CollegeofAnimalScienceandTechnology，GuangxiUniversity，Nanning，Guangxi530005) Abstract：Staphylococcusaureus，EscherichiacolinadBacilluscereusarethreecommonpathogensdairyCOW mastitis． ThreepairsofspecificoligonucleotideprimersweredesignedaccordingtotheDNA sequencesofgenenucinStaphylococ— CUSaureus，gene16S一23SrRNA inEscherichiacolina dgenehblA inBacilluscereus，na datriplexpolymerasechain reaction (PCR)assaywasdevelopedbyimprovinghtesystemsandproceduresofthreesinglePCRsandmultiplexPCR． ThetriplexPCRandtraditionalbacterialcultivationwereevaluatedby examining50clinicalmastitismilksamples．The resultshowednoCROSSreactionwasdetectedbyhtetriplexPCRamongthese3bacterianadtheothercorfllnonbacteria．Th e sensitivityoftriplexPCRtoStaphylococcusaureus，Escherichiacolina dBacilluscereuswas0．1pg／uL、0．01pg／uLna d0．1pg／ uLrespectively．Th eresultsshowedhtatmutiplexPCRwasmoresensitivehtna culturemethod． Keywords：DairyCOWS；Mastitis；PCR；Diang osis；Pathogens 奶牛乳房炎是危害世界奶牛业的主要疾病之 导致奶牛乳房炎的3种重要致病菌 [1-2]。传统的病 一 ， 它不仅影响产奶量，而且影响牛奶品质，