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利用DSN和SMARTTM技术构建绿僵菌产孢时期均一化全长cDNA文库.pdf
农业生物技术学报 Journal ofAgriculturalBiotechnology 2007,15 (5): 884~887
·研究论文 ·
利用 TM
DSN SMART
和 技术构建金龟子绿僵菌
产孢时期均一化全长 cDNA文库 *
张石柱 ，王中康，彭国雄 ， 曹月青 ，殷幼平 ，谢 磊 ，刘 静 ，夏玉先 **
(重庆大学生物工程学院基 因工程研究中心 ， 重庆市杀虫真菌农药工程技术研究中心 ，
功能基 因及调控技术重庆市重点实验室 ， 重庆 400030)
TM
cDNA DSN duplexspecificnuclease SMART (switching
摘要：为高 效获得与绿僵菌产孢相关的全长 ， 采用 （ ） 均一化技术与
mechanism at 5 end ofRNA transcript) 建库技术相结合 的方法 ，构建 了杀虫真菌金龟子绿僵菌 （ var.
忆
6 6
)菌株 CQMa102产孢时期的均一化全长 cDNA 文库。经检测， 原始文库滴度为 2.1 10 cfu/mL， 库容量超过 6 10 。 随
伊 伊
， ， 全长基 因的比例
机挑取 100个克隆 PCR方法测得文库重组率大于 95 ,插入片段平均长度 1500bp。小规模测序分析表 明
％
超过 60％。对组成性表达基因 3磷酸甘油醛脱氢酶 和微管蛋白 均一化前后丰度检测表明， 其丰度均有大幅
基本满足节约筛库的要求。
度的下降 ，
TM
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