大黄中蒽醌类成分的提取分离和鉴定.docVIP

大黄中游离蒽醌类成分的提取、分离与鉴定 一、实验目的 1.掌握蒽醌苷元的提取方法--双相酸水减法 2.掌握梯度PH萃取法提取分离大黄中各种蒽醌苷元的原理及操作方法 3.掌握羟基蒽醌类化合物的颜色反应及薄层色谱鉴别方法 二、实验原理 1.提取原理 双向酸水解法，为一相与酸水不相互溶的有机溶剂，另一相为酸水，加热回流水解的方法。由于大黄中的羟基蒽醌类化合物多以苷的形式存在，所以首先要将苷水解成苷元，本实验选用硫酸和乙酸乙酯作为双向酸水解的溶剂，采用加热回流方法，提取大黄药材中的游离蒽醌类化合物。根据苷元不溶于水，可溶于乙醚、乙酸乙酯等亲脂性有机溶剂的性质，即在加热回流提取过程中，稀硫酸可将蒽醌苷元水解成苷元，游离出来的蒽醌苷元随即溶于乙酸乙酯中，从而将蒽醌苷元提取出来。 分离原理 pH梯度萃取法 羟基蒽醌类化合物酸性强弱不同，用pH梯度法进行分离。具有羧基或多个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸氢钠溶液；具有一个β位酚羟基的蒽醌可溶于5%碳酸钠溶液；只具有α位酚羟基的蒽醌，酸性弱，只溶于氢氧化钠溶液。以分离酸度不同的蒽醌苷元。也可利用游离蒽醌的极性不同，采用硅胶柱色谱法进行分离。 （1）大黄中游离蒽醌的酸性强弱顺序 大黄酸（-COOH）＞大黄素（β酚-OH）＞芦荟大黄素（醇-OH）＞大黄素甲醚（-OCH3）≈大黄酚（-CH3） （2）大黄中游离蒽醌的极性大小顺序 大黄酸＞大黄素＞芦荟大黄素＞大黄素甲醚＞大黄酚 大黄酚和大黄素甲醚酸性相近，但极性不同，可用硅胶柱色谱法进行分离。 实验方法 1.总蒽醌苷元的提取、分离工艺流程 大黄药材（粗粉）50g 加20%H2SO4 100ml，乙酸乙酯250ml，水浴回流2h，稍冷过滤 乙酸乙酯提取液 药渣 去除下层酸水层，再用蒸馏水水洗2次（50ml/次） 直至乙酸乙酯层pH值呈中性 乙酸乙酯提取液 5%NaHCO3溶液萃取三次（80ml，60ml，40ml） 碱水层 乙酸乙酯层 滴加浓盐酸，调节pH=2，放置 5%Na2CO3溶液萃取三次（40ml/次） 沉淀物（黄色结晶或 黄色絮状沉淀） 碱水层 乙酸乙酯层 沉淀过滤，冰醋酸精制 滴加浓盐酸，调节pH=2，放置 0.25%NaOH溶液萃 黄色结晶（大黄酸） 沉淀物（橙色结晶或 取三次（40ml/次） 橙色絮状沉淀） 沉淀过滤， 碱水层 乙酸乙酯层 丙酮精制 滴加浓盐酸，调 5%NaOH溶液萃 橙色结晶（大黄素） 节pH=2，放置 取三次（40ml/次） 沉淀物 调pH=2,沉淀过滤 （橙色絮状沉淀） 黄色沉淀物 乙酸乙酯层 沉淀过滤，乙酸乙酯精制 硅胶柱色谱 黄色针晶 洗脱剂为石油醚（60-90℃） （芦荟大黄素） -乙酸乙酯（15：1） 大黄酚和大黄素甲醚混合物 2.总蒽醌苷元的提取 大黄粗粉50g，置500ml烧瓶中，加20%硫酸溶液100ml和乙酸乙酯250ml，水浴回流提取2h，放置，冷后过滤，残渣弃去，乙酸乙酯提取液置分液漏斗中，分出酸水层，乙酸乙酯提取液用蒸馏水洗2次（20ml/次），将乙酸乙酯放置在锥形瓶中，密封。 3.游离蒽醌的分离和精制 （1）将乙酸乙酯提取液置500ml分