H1N1亚型猪流感病毒HA基因的表达及单克隆抗体的制备.pdfVIP

中国兽医科学 2008，38(11)：962—967 ChineseVeterinaryScience 中图分类号：$852．659．5：Q786 文献标识码 ：A 文章编号 2008)110962—06 H1N1亚型猪流感病毒 HA基 因的表达及单克隆 抗体的制备 张祥斌 ，谢青梅 ，马静云 ，曹永长 ，冀 君 ，李少璃 ，毕英佐 * (1．华南农业大学 动物科学学院，广东 广州 510642；2．中山大学 生命科学学院，广东 广州 510275) 摘要：采用 RTPCR方法扩增 了H1N1亚型猪流感病毒 (SIV)广东株的血凝素 (HA)基 因，测序后对 HA基因进行了生物信息学分析。将 HA基 因克隆到高效可溶表达载体pBCX上，成功构建重组表达质粒 pBCX—HA。将其转化到大肠杆菌BI21(DE3)感受态细胞 中，用 IPTG进行诱导表达。诱导表达的HA融 合蛋白分子质量约为 94．0ku，表达产物 占菌体总蛋白的29．5 。经 Western—blot分析证实可溶表达的融 合蛋 白与 H1N1亚型猪流感病毒 阳性血清具有良好的免疫反应性。用纯化的HA融合蛋白作包被抗原用 于猪流感病毒单克隆抗体的筛选，成功筛选到 2株针对 HA蛋 白抗原表位的单克隆抗体 ；ElISA结果表明， 制备的 SIV单克隆抗体 IIIFsA C。与 HlNl亚型 SIV抗原具有特异的免疫反应性，为 H1N1SIV 的鉴别诊 断奠定了基础。 关键词 ：HlN1亚型猪流感病毒 ；血凝素；高效可溶表达 ；单克隆抗体 ExpressionofHA geneofH1N1subtypeswineinfluenzavirusand preparation ofamonoclonalantibodyagainstHA protein ZHANG Xiang—bin ，XIEQing—mei。，MA Jing—yun，CA()Yongchang ，JIJun ，LIShao—ti．BIYing—ZUO (1．College0厂AnimalScie7e．SouthChitlaAgri~ulturalUniversity，Guangzhou510642，China： 2．CollegeofLifeScienc’es，SunYat—SellUniversity，Guangzhou510275．(_71lina) Abstract：Thehemagglutinin(HA)geneofswineinfluenzavirus(SIV)H1N1subtypeisolatedfrom GuangdongProvinceofChinawasamplifiedbyRT PCR，andthenanalyzedonitsbiologicalinformationaf— tersequencing．TheHA genewasinserted intothevectorpBCX toconstructrecombinantplasmidpBCX— HA．ThepBCX HA wastransformedintoEscherickiacoliBI21(DE3)toinduceHA geneexpressionwith IPTG．Themolecularweightexpressedfusionproteinwas94．0kuin SDS～PAGE test，andtheexpression productaccountedfor29．5 ofthetotalE．coliproteins．W esternblotanalysisshowedthattheexpressed fusionproteincouldreactfavourablywithpositivebloodserum againstSIV H1N1．TheexpressedHA pro- teinwasusedascoatingantigentoselectmonoclonalantibodiesagainstSIV．TheElISA resultsindicated thatthepreparedrnonoclonalantibody11IF6A4CI。reactedwellwithSIV H1N1，whichwasusefulfordiag— nosisofSIV． Keywords：HlN1subtypeswineinflue