P311在小鼠浅Ⅱ度烧伤模型中对表皮干细胞迁移影响.pdfVIP

P311促进表皮干细胞迁移及机制研究 姚志慧、罗高兴、吴军、贺伟峰、孙薇、杨思思、谭江琳、杨俊杰、 刘岱松、姚志惹、徐瑞、王玉振、张小容胡晓红 第三军医大学西南医院烧伤研究所，创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室，疾病蛋白质组学重庆 市市级重点实验室400038 【摘要】目的：观察P31l在体外创伤模型中对表皮干细胞迁移的作用并探讨其机制。方法：(1) 应用Ⅳ型胶原快速黏附法分离培养人ESC，同时构建腺病毒空载体pAdEasy一增强型绿色荧光蛋白 h后行划痕 实验。划痕后O(即刻)、24、48、72h测量固定位置细胞迁移距离。(2)分离培养P3llK0及wT h测量固定 新生小鼠表皮干细胞，经丝裂霉素C处理2h后行划痕实验。划痕后0、24、48、72 位置细胞迁移距离。(3)PulldoWn实验检测P311对腺病毒转染人ESC及P31lKO及wT新生小鼠 Racl促进ESC的迁移功能。 Racl 关键词：P311表皮干细胞细胞迁移RhoA P31 1在小鼠浅II度烧伤模型中对表皮干细胞迂移的影响 姚志慧张小容胡晓红贺伟峰罗高兴吴军 第三军医大学西南医院烧伤研究所，创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室，疾病蛋白质组学重庆 市市级重点实验室400038 【摘要】目的：观察P311在小鼠浅II度烧伤模型中对表皮干细胞迁移的作用并探讨其机制。方 压力下制作小鼠烫伤模型，进行取材、固定、包埋、切片、HE染色，判断烫伤深度。(2)、取18 u 续3天腹腔注射50 h取创面皮肤组织制作连续切片，免疫组织化学染色，观察P31l阳性 浅II度烧伤创面。伤后72 注射相同数量腺病毒载体，观察创面愈合情况。结果：小鼠皮肤浅II度烧伤模型致伤条件为：温 度65℃，致伤时间3s，压力为探头重力。浅Ⅱ度烧伤后不同时相点，P3ll在创面不同部位的表 达量各不相同。伤后创面毛囊、新生表皮中P311表达量随时间延长逐渐上升；创周表皮及毛囊 阳性细胞和Brdu阳性细胞共定位。将纯化腺病毒注射于全层皮肤缺损模型创周，P31l高表达组 可明显促进创面愈合。结论：P11可明显促进小鼠浅II度烧伤创面愈合及表皮干细胞迁移。 【关键词】：P311表皮干细胞细胞迁移创面修复烧伤 烧伤后一氧化氮对表皮干细胞迁移功能影响的在体研究 罗高兴、詹日兴、孙薇、姚志慧、杨思思、谭江琳、贺伟峰、崔艳艳、周俊峄、 杨俊杰、刘岱松、徐瑞、王玉振、张小容、胡晓红、吴军 第三军医大学西南医院全军烧伤研究所，创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室，疾病蛋白质组学 重庆市市级重点实验室，重庆400038 【目 的】： 探讨外源性一氧化氮(No)对在体表皮干细胞(ESC)迁移功能的影响。 【方法】：以新生c57b1／6小鼠为实验动物，采用传统Brdu滞留实验标记表皮干细胞。采用超 衡温烫伤仪建立浅二度烫伤模型，通过温度和时间两个因素控制烫伤的深度，进行病理切片做组 织学检查，判定烫伤的深度。采用Brdu滞留法，在浅二度烫伤模型下，组化检测烫伤后48小时 ESC迁移情况，从而建立在体检测ESC迁移模型。在在体ESC迁移模型下，予分组腹腔注射NO 合成酶抑制剂L—NMMA、NO合成底物L一精氨酸、甘氨酸及同等体积的生理盐水，通过组化检测NO 对在体ESC迁移影响情况。 【结果】：BrdU滞留实验中，随着追踪时间的推移，Brdu在皮肤细胞核中的表达逐渐减弱、减 少；BrdU追踪至6周以后阳性细胞主要分布于毛囊隆凸部。通过超衡温烫伤仪控制烫伤温度为 65℃和时间为3秒可建立成年C57bl／6小鼠浅二度烫伤模型。在体检测ESC迁移模型中发现，再 生表皮层中发现较多BrdU阳性细胞，其BrdU表达量较毛囊隆凸部明显减少。N0对在体ESC迁移 实验中发现，在同等切片再生表皮中BrdU刚性细胞数L一精氨酸组及L—NMMA组与