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瘤胃微生物总DNA快速提取法研究.pdf
第27卷第1期 家畜生态学报 V01．27No．1
Acta AnimalisDomastici Jan2006
2006年1月 Ecologiae
瘤胃微生物总DNA快速提取法研究
淡瑞芳1，龙瑞军1、弘，杨予海3
(1．甘肃农业大学草业学院，甘肃兰州730070；2．中国科学院西北高原生物所，青海西宁8lo008；
3．青海省三角城种羊场，青海刚察812300)
[摘 要] 本文介绍了一种简便快速地提取瘤胃微生物细胞总DNA的方法，该法是对提取
植物的CTAB法进行改进而成。与经典反复冻融+SDS／蛋白酶K裂解法相比，该法可在数
小时内高效地提取瘤胃内容物总DNA，经琼脂糖凝胶电泳对所提取瘤胃微生物总DNA进行
检测，证明所获得的瘤胃总DNA符合分子生物学操作要求。
[关键词]瘤胃微生物；DNA提取；CTAB；SDS
[中图分类号]s811．5 [文献标识码]A [文章编号]
反刍动物瘤胃微生物一直是一个研究热点，但由 在国内仅见安登弟嘲(2003)的报道。本实验室经过
于瘤胃是一个特殊的厌氧环境，采用传统的微生物培
养不但耗时耗力，而且不能全面了解瘤胃微生物。直 进行了改进，同时与反复冻融+SDS／蛋白酶K裂解
接提取样品中微生物总DNA进行分析的方法，避开 法进行了比较，建立了一套更为简便快速地提取瘤胃
了纯培养的步骤，减少了处理时间[1]，而且能对很多 微生物总DNA的有效方法。
难培养的微生物进行分析。目前报道的瘤胃微生物
1材料与方法
的DNA提取方法有三种：十二烷酰一肌氨酸／蛋白酶
K裂解法，是用终浓度含2％的十二烷酰一肌氨酸和 1．1 材料
1．1．1 青海细毛羊瘤胃内容物 于2004年9月
2mg／mL蛋白酶K的缓冲液裂解细胞抽提其总
24日，取自于青海省三角城种羊场。当地海拔3240
DNA[3](Tajima等，1999)；反复冻融十SDS／蛋白酶K
m，青海细毛羊为常年放牧。试羊为二只白色被毛、
裂解法H3(Bams等，1994)，是将样品与抽提缓冲液混
合后在一80℃和65℃间反复冷冻一消融，使细胞壁裂体重50kg的1．5岁健康羯羊。
1．1．2
解，然后用SDS和蛋白酶K处理获得总DNA。和玻 生化试剂
璃珠破碎法是利用机械力破坏细胞壁暴露DNAL5]
ammonium
(cetyltrimethyl
(Stahl等，1988)。在这两种方法中，第二种所获得的
总DNA所包含的微生物较为广泛，而第一种方法偏 脂糖购自sigma。其它国内生产的化学试剂均为分
好于“较易裂解”的革兰氏阴性细菌，其覆盖范围相对 析纯级。
1．1．3
较窄[3](Tajima，1999)，第三种方法应用较为广泛，已
20GⅡ高速冷冻离心机，上海安亭科学仪器厂；电
多为研究者采用[6』](wood等，1998、Tajima等，
2000)。要获得功能基因，首先需由样品获得可用于热恒温水浴锅，上海永兴昌仪器厂。
分子操作的全部微生物的总DNA。还需要根据其特 1．2 方法
有的理化和生物学特性，优化出一种特有的提取 1
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