9.4 层析分离法.pptVIP

第九章 分析测定中的分离方法 9.4.1 柱层析法 9.4.2 平面层析法 9.4.1 柱层析法 2. 凝胶柱层析法 凝胶柱层析法 9.4.2 平面层析法 平面层析法 操作技术 2.展开剂 3. 点样 4.显色、检测 特点及应用 缺点: 第四节层析分离法 1. 吸附柱层析法 以吸附剂为固定相(硅胶、氧化铝和活性炭等)。 根据试样的性质、吸附剂的活性和流动相的极性这三种因素来选择适宜的条件。 被分离的组分极性较强，应选择吸附性能较弱的吸附剂，同时选择极性较强的洗脱剂；或反之。 吸附柱层析法可用于芳香族化合物的分离、倍半萜类烯物的分离等。 利用凝胶或其他具有分子筛性质的多孔性物质做固定相。 对具有不同相对分子质量的溶质或不同大小的分子进行分离纯化的一种方法。 凝胶：葡萄糖凝胶、聚丙烯酰凝胶、琼脂糖凝胶、聚苯乙烯凝胶和多孔硅胶等。 分离原理：当被分离的物质通过柱子时,小分子可以自由进入凝胶孔道(kd?1),在柱内停留时间最长；大分子因不能进入孔道(kd?0),在柱内停留时间最短；居中分子(kd?0～1)，它们将按照顺序被洗脱。 应用 生化领域，如蛋白质、氨基酸、核酸、肽类等生物物质的分离和制备； 抗菌素的分离、纯化，肝炎病毒的分离等； 高聚物的相对分子质量和分子质量分布测定。 平面层析法(planar chromatography)主要包括薄层层析法和纸层析法两大类。 薄层层析：将固定相涂布于平面载板上。 纸层析：直接以滤纸作为固定相。 装置简单、操作简便。 常作为一种不挥发高沸点有机物、生物大分子混合物的有效、快速、简便的分离分析手段而被应用。 平面层析法与其他色谱分离有着相同或相似的分离机理。 纸层析和薄层层析流动相的移动是依靠毛细作用。 将试样点在色谱滤纸或层析板的一端，并将该端浸在作为流动相的溶剂（常称之为展开剂）中，随着溶剂向上的移动，经过试样点时，带动试样向上运动。 1.层析纸和层析板 特制的色层滤纸。按需要剪裁成长条形（或筒形）。层析板是用专门的涂布器把浆状的吸附剂（硅胶或氧化铝，200～250目）均匀地涂在长条形玻璃板上（厚度0.15～0.5mm）。干燥后即可使用。 由一种或多种溶剂按一定比例组成。如用纸层析分离氨基酸时，常用的展开剂组成和配比为 正丁醇﹕乙酸﹕ 水 = 4﹕ 1﹕1 。 用微量注射器或玻璃毛细管吸取一定量试样点在原点上。试样点的直径一般应小于5mm。可并排点多个试样同时展开。 有些组分在紫外光照射下产生荧光，可在紫外灯下用铅笔将组分斑点描绘出来。常用的显色方法有喷洒显色剂、碘蒸气熏或氨水熏等。 平板色谱简单、方便、操作费用低； 可以在一块层析板上同时展开多个试样及将多条滤纸同时展开； 采用方形薄层板还可以方便地进行二维展开，即按一般方法展开后，改变方向和展开剂再次展开，进一步改善分离效果； 试样一般不需要经过预处理即可分离。 缺点： 分离效率较低，不适用于挥发性试样分离。定性定量不便。 应用：平板色谱法在染料、农药、医药、有机酸碱类化合物、糖类化合物、氨基酸、蛋白质及中草药中有效成分的分离分析中经常被使用。也可以用于无机离子的分离。还经常作为高效液相色谱的一种预试方法。 * *