喘可治注射液逆转哮喘患者Th1／Th2失衡的作用机制.pdfVIP

山东医药2008年第48卷 4 喘可治注射液逆转哮喘患者 Thl／Th2 失衡的作用机制 张 琦，许玲华。李 萍。拾景海，李 军 (徐州市中心医院，江苏徐州 221009) [摘要] 采集发作期哮喘患者的静脉血，分离外周血单个核细胞 (PBMC)，分为两份，一份加入 PHA(对照 组)，另一份加入喘可治注射液和PHA(观察组)，培养48h后分别收集上清液和细胞沉淀，采用RT-PCR方法测定 细胞沉淀中T．betmRNA、GATA~mRNA的表达强度，ELISA法测定上清液中IL-4、IL-5、IL一13、IFN·的表达水平。 结果：①观察组细胞沉淀中T．betmRNA的表达强度较对照组显著增强，GATA-3mRNA表达强度显著减低；T—bet／ GATA．3比值较对照组显著增高。②观察组上清液中IL-4、IL-5、IL一13水平均较对照组显著降低，IF?q—水平较对照 组显著增高。认为喘可治注射液可通过上调 T-bet表达 、下调 GATA~表达来调节T-bet／GATA一3比值 ，逆转Thl／ Th2细胞失衡。 [关键词] T-bet；GATA~；细胞因子；哮喘；喘可治注射液 [中图分类号] 11562．2 [文献标识码] B [文章编号] 1002-266X(2008)42-0071-02 支气管哮喘是以嗜酸性细胞、T细胞、肥大细胞 集上清液和细胞，上清液一2O℃冻存待测。 等细胞和一系列细胞因子参与为特征的慢性气道炎 1．2．2 检测方法 ①T—betmRNA和GATA-3mR— 症。新近研究表明，，I}l细胞在分化为Thl和Th2的 NA表达强度检测：参考文献 ，采用RT—PCR方法 过程中，分别受到转录因子T．bet和 GATA-3的调 检测。引物序列 T—betP1为：5一CCTCGCACCTG— 节…。本实验使用喘可治注射液体外孵育哮喘患 GAGCTGGCTG．3，T—betP2为：5一，IT】rATCAGTrGG． 者PBMC，检测细胞沉淀中T．betmRNA和 GATA-3 GAAAATAGTTA一3，扩增长度为334bp；GATA一3P1 mRNA的表达强度及上清液中IFN一 IL-4、IL-5、IL- 为：5一GAATGCCAATGGGGACCCTG-3，GATA一3P2 13水平，探讨喘可治注射液逆转Thl／Th2免疫失衡 为：5一CTAACCCATGGCGGTGACCA-3，扩增长度为 的作用机制。 343bp；B—actinPI为：5-GTGGGGCGCCCCAGGCAC 1 资料与方法 CA-3，BactinP2为：5．CrCC1]rAATGTCACGCACG 1．1 临床资料 选择2007—2008年在我院呼吸科 ArITIC_3，扩增长度539bp。以B—actin基因为内参 门诊治疗的3O例发作期支气管哮喘患者，男 l3例、 照，对产物进行琼脂糖凝胶电泳图像分析。②细胞因 女 17例，年龄(37．3±19．8)岁，病程 (15．8±12．1) 子表达水平检测：采用 ELISA法检测上清液中IFN一 a。均符合2003年中华医学会呼吸病学分会哮喘学 IL-4、IL-5、IL-13水平，IFN一 IU4、IL-5检测试剂盒 组制定的诊断标准，ls用力呼气容积占预计值的百 购 自深圳晶美生物公司，IL．13检测试剂盒购 自上海 分比(FEV。％)为 (65．4±19．7)％。患者近 3个月 西唐生物公司，按试剂盒说明书进行操作。 内均未使用糖皮质激素，胸部 x线检查排除肺部感 1．2．3 统计 方法 采用SPSS10．0统计软件进行 染，无严重心、肝、肾疾患及恶性肿瘤病史。 数据处理，结果以 ±s表示，采用配对样本的t检 1．2 方法 验。P≤0．05为有统计学意义。 1．2．1 细胞培养方法 采集患者空腹外周静脉血 2 结果 8ml，EDTA抗凝，按常规淋巴